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申请/专利权人：兰州大学

摘要：本发明公开禾草种带内生真菌镜检前种子一体化处理装置，包括装置底座、两根连接管、加热装置和盛液圆盘、洗涤盘、装样管、放置装样管的圆盘、四根支柱、两个广口瓶、一个浴头、一个加样装置、三个滑动装置、一个发电机，将四根支柱分别用螺丝固定在装置底座上，三根支柱围绕加热装置固定，另一根支柱固定在洗涤盘周围，在加热装置和洗涤盘之间的一根支柱安装放置装样管的圆盘，在加热装置周围的三根支柱分别固定有三个滑动装置，在三个滑动装置上分别固定有两个改造广口瓶和加样装置，在洗涤盘周围的支柱上固定有浴头，浴头下方用螺丝把两根连接管跟装置底座顶部的圆孔固定在一起，连接管内连接有洗涤盘。缩减处理时间、简化吸取过程。

主权项：1.禾草种带内生真菌镜检前种子一体化处理装置，包括装置底座7、两根连接管6、加热装置13和盛液圆盘15、洗涤盘11、装样管16、放置装样管的圆盘12、四根支柱5、两个广口瓶1、一个浴头4、一个加样装置17、三个滑动装置8、一个发电机10，其特征在于，将四根支柱5分别用螺丝固定在装置底座7上，其中三根支柱围绕加热装置13固定，另外一根支柱固定在洗涤盘11周围，在加热装置13和洗涤盘11之间的一根支柱上安装放置装样管的圆盘12，在加热装置13周围的三根支柱5上分别固定有三个滑动装置8，在三个滑动装置8上分别固定有两个改造广口瓶和加样装置17，在洗涤盘11周围的支柱5上固定有浴头4，浴头4下方用螺丝把两根连接管6跟装置底座7顶部的圆孔固定在一起，连接管6内连接有洗涤盘11；装置底座7是长方体中空不锈钢材料，装置底座底部设有一个直径4cm的圆孔，用塑料圆盖盖住装置底座底部圆孔，顶部设有两个圆孔，用螺丝把两根8cm的空心不锈钢连接管跟顶部的圆孔固定在一起；加热装置13是圆柱形不锈钢保温材料制成，加热装置内置有两根加热管14用于加热，在加热装置侧壁上部设有进水口，加热管头上安装有一个报警装置和插头；连接管6为空心不锈钢连接管，放置装样管的圆盘12可以360度旋转；盛液圆盘15中间高，周围低，此盛液圆盘15上共分布98个上部没封口的盛液管,圆柱管之间设有间距，圆盘周围有一个密封垫圈；发电机10上固定连接着一个直径不锈钢漏斗，盛液圆盘15、加热装置13和改造过的小型可调速正反转发电机10组装成一个整体，用螺丝把不锈钢漏斗跟加热装置13固定在一起，再把盛液圆盘15紧紧的盖在加热装置顶部形成一个密封的整体；洗涤盘11是一个漏斗形不锈钢中空装置；放置装样管的圆盘12内放置有装样管，装样管16是圆柱管,圆柱管周围和底部均匀分布开设有大小一致的多个小孔，内置一个网框；放置装样管的圆盘12中间高，周围低，装样管16放置在放置装样管的圆盘12上后紧紧的盖在盛液圆盘15之上，使装样管16跟盛液管套在一起，所述盛液管的直径大于装样管16的直径；加样装置17由两部分组成，上部分是一个小漏斗，下部分是圆珠笔状的管；两个广口瓶距低5cm处设有一个控制阀,体积为500毫升，一个为白色广口瓶1、另一个为棕色广口瓶3。

全文数据：禾草种带内生真菌镜检前种子一体化处理装置技术领域本发明涉及一种大批量禾草种带内生真菌镜检前种子一体化处理装置，它集装样，软化，洗涤，染色和加热一体化，大大缩减了镜检前种子处理时间、统一了样品量、强化了染色效果和试剂的循环利用。背景技术禾草内生真菌grassendophyte是指在禾草体内度过大部分或者全部生命周期，但却不会引起禾草外部显示任何病害症状的一大类真菌。从最初发现黑麦草Loliumperenne和高羊茅Festucaarundinacea引起家畜中毒到后来其携带的内生真菌被发现，以及进一步的研究证实，内生真菌的存在不但导致家畜中毒而且能显著提高宿主在群落中的竞争力，也因禾草内生真菌的这种重要生理和生态作用，使其逐步成为国内外研究的热点之一，这也给内生真菌检测技术的发展提供了契机。目前禾草内生真菌的检测方法有镜检和分离检测、酶联免疫吸附测定法Enzyme-LinkedImmunosorbentAssayELISA、全基因组测序、实时荧光PCR法RealtimePCR和利用次生代谢物间接检测。1.镜检：1.用NaOH种皮软化；2.用自来水洗涤；3.染色；4.镜检。2.分离检测：用酒精浸泡10min，NaClO浸泡8min，再用无菌水反复冲洗数次，用滤纸吸干后，放置PAD培养，内生真菌在PDA培养基生长一般需要一个礼拜。3.酶联免疫吸附测定法：1.待检标本提取2.用已知特异性抗体包被固相载体；3.加待检标本，经过温育使相应抗原与固相抗体结合；洗涤，除去无关的物质；4.加酶标特异性抗体，与已结合在固相抗体上的抗原反应；洗涤，除去未结合的酶标抗体；5.加底物显色。终止反应后，目测定性或用酶标仪测量光密度值进行定量测定。4.全基因组测序:提取菌丝DNA，再进行测序。5.实时PCR，该技术是在常规PCR的基础上加入了荧光特殊物质来标记产物，分析产物，最后通过标准曲线计算其初始浓度。6.利用次生代谢物间接检测：生物碱的提取，目前对于生物碱的检测主要是运用不同的色谱检测方法：高效液相色谱法HPLC，质谱法MS和气相色谱法GC。HPLC检测生物碱时需要选择适合该生物碱分离的流动相和检测器，不同种类的生物碱，其选择的流动相pH值和浓度不同。从上述可以看出，镜检跟分离检测相比所需时间要短，可以大批量检测；与酶联免疫吸附测定法相比简单易操作、耗时短、经济实惠；与全基因组测序和实时PCR相比经济实惠，适合大批量检测；与利用次生代谢物间接检测耗时短、经济实惠、简单易操作。但这种简单易操作、耗时短、经济实惠的方法在装样，软化，洗涤，染色和加热方面却没有与之相关的装置，平时人们用离心管代替。而用离心管存在很多问题：1.装样时，没有参考标准，因人而异，造成种子的浪费和软化，染色的不彻底。2.用NaOH对禾草种子进行软化处理后，需要将软化液吸取干净，由于针管头细小，在吸取过程容易造成针管堵塞，需要多次反复吸取，耗费大量的时间。3.由于禾草种子小，在洗涤时会使部分种子外流，造成浪费，同时需要反复清洗，尽量把NaOH溶液清洗干净，否则会对染色造成影响，这个过程对大批量的禾草种子来说显得异常繁琐和浪费时间。4.染色时需要加热，需要把离心管移到水浴锅中加热，在过程中可能混淆和洗掉原先的标记，造成实验的失败，同时要把染色完的试剂倒掉，造成试剂的浪费，对环境造成一定的污染。发明内容为了解决上述装置中存在的问题，本发明提供了一种集装样，软化，洗涤，染色和加热的禾草种带内生真菌镜检前种子一体化处理装置，大大缩减了镜检前种子处理时间、简化了其软化液和洗涤液的吸取过程。为了到达上述目标，本发明提供以下技术方案：禾草种带内生真菌镜检前种子一体化处理装置，包括装置底座7、两根连接管6、加热装置13和盛液圆盘15、洗涤盘11、装样管16、放置装样管的圆盘12、四根支柱5、两个广口瓶1、一个浴头4、一个加样装置17、三个滑动装置8、一个小型可调速正反转发电机10，四根支柱5分别用螺丝固定在装置底座7上，三根支柱围绕加热装置13固定，另一根支柱固定在洗涤盘11周围，在加热装置13和洗涤盘11之间的一根支柱上安装放置装样管的圆盘12，在加热装置13周围的三根支柱5上分别固定有三个滑动装置8，在三个滑动装置8上分别固定有两个白色改造广口瓶和加样装置17，在洗涤盘11周围的支柱5上固定有浴头4，浴头下方用螺丝把两根连接管6跟装置底座7顶部的圆孔固定在一起，连接管内连接有洗涤盘11。进一步，装置底座7是长方体中空不锈钢材料，装置底座底部设有一个直径4cm的圆孔，用塑料圆盖盖住装置底座底部圆孔，顶部设有两个直径8cm的圆孔。进一步，加热装置13是直径28cm，高10cm的圆柱形不锈钢保温材料制成，加热装置内置有两根加热管14用于加热，在加热装置侧壁上部设有进水口，加热管头上安装有一个报警装置和插头。进一步，连接管6为直径8cm的空心不锈钢连接管，放置装样管的圆盘12可以360°旋转。进一步，盛液圆盘15直径为28cm，中间高，周围低，坡度8°，此盛液圆盘15上共分布98个直径1cm，高5cm上部没封口的圆柱管,圆柱管之间间距为1cm，圆盘周围有一个厚度2cm的密封垫圈。进一步，发电机10上固定连接着一个直径28cm不锈钢漏斗，盛液圆盘15、加热装置13和改造过的小型可调速正反转发电机10组装成一个整体。进一步，洗涤盘11是一个漏斗形不锈钢中空装置。进一步，放置装样管的圆盘12内放置有装样管16，装样管16是直径0.8cm，高5cm的圆柱管,圆柱管周围和底部均匀分布开设有大小一致的多个小孔，内置一个直径0.7cm，高1cm的网框；放置装样管的圆盘12直径28cm，中间高，周围低，坡度8°。进一步，加样装置17由两部分组成，上部分是一个小漏斗，下部分是直径0.5cm，高3cm的圆珠笔。进一步，两个广口瓶1距低5cm处设有一个控制阀,体积为500Ml，一个为白色广口瓶1、另一个为棕色广口瓶3。与现有技术相比较，本发明具有如下的有益效果：统一了样品量。强化了洗涤和染色效果。减小了混淆和洗掉标记的概率。增强了试剂的循环利用，减轻了对环境的污染。大大缩减了镜检前种子处理时间、简化了其软化液和洗涤液的吸取过程。附图说明图1为本发明装置平台结构的外观结构示意图。图2为本发明装置最佳的实施的俯视图。图3为本发明装置加热装置的结构示意图。图4为图3的局部分解图。图5为本发明装置盛液圆盘的结构示意图。图6为本发明装置装样管的结构示意图。图7为本发明装置加样装置的结构示意图。附图标记说明：1.白色广口瓶；2.开关；3.棕色广口瓶；4.浴头；5.支柱；6.连接管；7.底座；8.三个滑动装置；9.插头；10.发电机；11.洗涤盘；12。放置装样管的圆盘；13.加热装置；14.加热丝；15.盛液圆盘；16.装样管；17.加样装置。具体实施方式以下结合附图对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。如图1-7所示，禾草种带内生真菌镜检前种子一体化处理装置，包括装置底座7、两根连接管6、加热装置13、盛液圆盘15、洗涤盘11、装样管16、放置装样管的圆盘12、四根支柱5、两个广口瓶1、一个浴头4、一个加样装置17、三个滑动装置8、一个小型可调速正反转发电机10，四根支柱5分别用螺丝固定在装置底座7上，三根支柱围绕加热装置13固定，另一根支柱固定在洗涤盘11周围，在加热装置13和洗涤盘11之间的一根支柱上安装放置装样管的圆盘12，在加热装置13周围的三根支柱5上分别固定有三个滑动装置8，在三个滑动装置8上分别固定有两个白色改造广口瓶和加样装置17，在洗涤盘11周围的支柱5上固定有浴头4，浴头下方用螺丝把两根连接管6跟装置底座7顶部的圆孔固定在一起，连接管内连接有洗涤盘11。装置底座7是长方体中空不锈钢材料，装置底座底部设有一个直径4cm的圆孔，用塑料圆盖盖住装置底座底部圆孔，顶部设有两个直径8cm的圆孔，用螺丝把两根8cm的空心不锈钢连接管跟顶部的圆孔固定在一起。加热装置13是直径28cm，高10cm的圆柱形不锈钢保温材料制成，加热装置内置有两根加热管14用于加热，在加热装置侧壁上部距顶3cm设有直径1.5cm的进水口，加热管头上安装有一个报警装置和插头。连接管6为直径8cm的空心不锈钢连接管，放置装样管的圆盘12可以360°旋转。盛液圆盘15直径为28cm，中间高，周围低，坡度8°，此盛液圆盘15上共分布98个直径1cm，高5cm上部没封口的圆柱管,圆柱管之间间距为1cm，圆盘周围有一个厚度2cm的密封垫圈。发电机10上固定连接着一个直径28cm不锈钢漏斗，盛液圆盘15、加热装置13和改造过的小型可调速正反转发电机10组装成一个整体。用螺丝把不锈钢漏斗跟加热装置13固定在一起，再把盛液圆盘15紧紧的盖在加热装置顶部形成一个密封的整体。洗涤盘11是一个漏斗形不锈钢中空装置。放置装样管的圆盘12内放置有装样管16，装样管16是直径0.8cm，高5cm的圆柱管,圆柱管周围和底部均匀分布开设有大小一致的多个小孔，内置一个直径0.7cm，高1cm的网框；放置装样管的圆盘12直径28cm，中间高，周围低，坡度8°。加样装置由两部分组成，上部分是一个小漏斗，下部分是直径0.5cm，高3cm的圆珠笔。两个广口瓶1距低5cm处设有一个控制阀,体积为500Ml，一个为白色广口瓶1、另一个为棕色广口瓶3。用螺丝将四根支柱固定在装置底座上，其中三根围绕加热装置固定，另外一跟固定在洗涤盘周围，将安装在加热装置和洗涤盘之间的一根支柱上安装放置装样管的圆盘12，圆盘可以360°旋转；然后将三个滑动装置固定在加热装置周围的三根支柱上，浴头固定在洗涤盘周围的支柱上，最后将两个广口瓶和加样装置分别固定在三个滑动装置上。当使用所述装置时，首先，在白瓶中加入NaOH溶液，在棕色瓶加入苯胺蓝染色剂，将再装样管放置在放置装样管的圆盘上，后紧紧的盖在盛液圆盘之上，使装样管跟盛液管套在一起；其次，插上插头，打开电源，调节电动机的转速，使其缓慢匀速转动，再用加样装置向装样管加入样品，够不着时推动滑动装置；三，调节电动机的转速跟白色瓶控制阀的大小，够不着时推动滑动装置，使NaOH溶液尽量滴入装样管中，盖上盖过夜；四，将放置装样管的圆盘移到洗涤盘中，然后把浴头接到水龙头上进行洗涤，洗涤液从装样管的小孔进入到洗涤盘中流到底座中；五，将盛液圆盘中的NaOH溶液倒掉，然后将放置装样管的圆盘移到盛液圆盘，紧紧的套在一起；六，调节电动机的转速跟棕色瓶控制阀的大小，够不着时推动滑动装置，使苯胺蓝染色剂尽量滴入装样管中，盖上盖，关掉电动机；七，插上插头，进行加热，当报警发出报警信息后拔掉插头，使其种子充分染色，盛液圆盘中苯胺蓝染色剂可以再次利用。以上所述仅为说明本发明的实施方式，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

权利要求：1.禾草种带内生真菌镜检前种子一体化处理装置，包括装置底座7、两根连接管6、加热装置13和盛液圆盘15、洗涤盘11、装样管16、放置装样管的圆盘12、四根支柱5、两个广口瓶1、一个浴头4、一个加样装置17、三个滑动装置8、一个发电机10，其特征在于，将四根支柱5分别用螺丝固定在装置底座7上，其中三根支柱围绕加热装置13固定，另外一根支柱固定在洗涤盘11周围，在加热装置13和洗涤盘11之间的一根支柱上安装放置装样管的圆盘12，在加热装置13周围的三根支柱5上分别固定有三个滑动装置8，在三个滑动装置8上分别固定有两个改造广口瓶和加样装置17，在洗涤盘11周围的支柱5上固定有浴头4，浴头4下方用螺丝把两根连接管6跟装置底座7顶部的圆孔固定在一起，连接管6内连接有洗涤盘11。2.根据权利要求1所述禾草种带内生真菌镜检前种子一体化处理装置，其特征在于，装置底座7是长方体中空不锈钢材料，装置底座底部设有一个直径4cm的圆孔，用塑料圆盖盖住装置底座底部圆孔，顶部设有两个圆孔。3.根据权利要求1所述禾草种带内生真菌镜检前种子一体化处理装置，其特征在于，加热装置13是圆柱形不锈钢保温材料制成，加热装置内置有两根加热管14用于加热，在加热装置侧壁上部设有进水口，加热管头上安装有一个报警装置和插头。4.根据权利要求1所述禾草种带内生真菌镜检前种子一体化处理装置，其特征在于，连接管6为空心不锈钢连接管，放置装样管的圆盘12可以3600旋转。5.根据权利要求1所述禾草种带内生真菌镜检前种子一体化处理装置，其特征在于，盛液圆盘15中间高，周围低，此盛液圆盘15上共分布98个上部没封口的圆柱管,圆柱管之间设有间距，圆盘周围有一个密封垫圈。6.根据权利要求1所述禾草种带内生真菌镜检前种子一体化处理装置，其特征在于，发电机10上固定连接着一个直径不锈钢漏斗，盛液圆盘15、加热装置13和改造过的小型可调速正反转发电机10组装成一个整体。7.根据权利要求1所述禾草种带内生真菌镜检前种子一体化处理装置，其特征在于，洗涤盘11是一个漏斗形不锈钢中空装置。8.根据权利要求1所述禾草种带内生真菌镜检前种子一体化处理装置，其特征在于，放置装样管的圆盘12内放置有装样管，装样管16是圆柱管,圆柱管周围和底部均匀分布开设有大小一致的多个小孔，内置一个网框；放置装样管的圆盘12中间高，周围低。9.根据权利要求1所述禾草种带内生真菌镜检前种子一体化处理装置，其特征在于，加样装置17由两部分组成，上部分是一个小漏斗，下部分是圆珠笔。10.根据权利要求1所述禾草种带内生真菌镜检前种子一体化处理装置，其特征在于，两个广口瓶距低5cm处设有一个控制阀,体积为500Ml，一个为白色广口瓶1、另一个为棕色广口瓶3。

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