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申请/专利权人:苏州桑尼赛尔生物医药有限公司
摘要:本发明涉及非病毒式定点敲入方法及其在CAR‑T细胞治疗中的应用。具体地,本发明利用修饰的引物进行模版DNA的PCR扩增,并且使用修饰的模版DNA作为供体DNA进行基因定点敲入,其中所述修饰的引物包含:i5’‑硫代磷酸PS修饰连同5’‑生物素‑三甘醇Biotin‑TEG修饰;或ii5’‑锁核酸LNA修饰。相较于先前方法,本发明的方法实现了更高效的精确转导方式、更简单的CAR‑T细胞制备方式、更安全且更持久的表达以及更多变的设计。
主权项:1.一种制备CAR-T细胞的方法,所述方法包括:1将Cas9蛋白与打靶sgRNA体外混合以形成RNP复合体;2利用修饰的引物进行模版DNA的PCR扩增,获得修饰的双链DNA,其中所述修饰的引物包含:i在上下游引物5’端第1个碱基处的生物素-三甘醇修饰以及第2、3、4、5和6个碱基处的硫代磷酸修饰;或ii在上下游引物5’端第1、2和3个碱基处的锁核酸修饰;3将所述RNP复合体与所述修饰的双链DNA转染到T细胞中,获得所述CAR-T细胞。
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百度查询: 苏州桑尼赛尔生物医药有限公司 非病毒式定点敲入方法及其在CAR-T细胞治疗中的应用
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