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一种脲酶响应型膀胱癌miRNA检测纳米探针的制备方法及应用 

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申请/专利权人:徐州医科大学

摘要:本发明公开了一种脲酶响应型膀胱癌miRNA检测纳米探针的制备方法及应用,该方法将磁性Fe3O4纳米粒子和脲酶连接到SiO2表面,将修饰了荧光基团和淬灭基团的H1、H2分别连接到金纳米棒和Fe3O4表面,制备出能够特异性捕获靶miRNA且释放荧光的Janus纳米探针。该方法稳定可靠、重复性好,所制备的Janus纳米探针具有较好的稳定性和分散性,能通过脲酶驱动在尿液环境中充分扩散,实现H1、H2与miRNA特异性结合;再通过磁分离和富集效应,实现信号放大;通过脲酶催化充分捕获靶miRNA,实现无创检测。此外,hDNA的稳定结构也在一定程度上提高了检测的灵敏度和特异性,为膀胱癌的无创诊断提供新思路。

主权项:1.一种脲酶响应型膀胱癌miRNA检测纳米探针的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:1将100~500mgCTAB与0.5~2mg三水合氯金酸、10~50mg硼氢化钠制备的种子溶液加入到由2~5gCTAB、0.1~0.5g油酸钠、15~40mg三水合氯金酸、0.5~1mL盐酸、10~15mg硝酸银和2~5mg抗坏血酸制备的生长液中,待两种溶液混合均匀后,在20~50℃下静置10~30h得到AuNR溶液;2将400~600mgCTAB与10~20mgAuNR溶液、1~3mL无水乙醇、0.5~1mL氨水和10~20μLBTEE混合,并在20~50℃下搅拌2~10h得到SiO2@AuNR溶液;3将10~20mgSiO2@AuNR与60~90uLAPTES在20~50℃下混合搅拌8~15h,离心洗去未反应APTES,接着向氨基化的SiO2@AuNR溶液中加入0.5~2mg羧基化Fe3O4,20~50℃下搅拌10~30h,得到Fe3O4-SiO2@AuNR溶液;4将1~3mL25%的戊二醛溶液缓慢滴加到10~20mgFe3O4-SiO2@AuNR溶液中,20~50℃下搅拌2~4h,接着向溶液中加入40~80mg脲酶,并在20~50℃搅拌10~12h,通过脲酶的固定得到只有一侧含有脲酶的Fe3O4脲酶-SiO2@AuNR;5将20~40μL浓度为5~20uMH1和40~70μL浓度为5~20μMH2加入到10~20mL浓度为1~2mgmL的Fe3O4脲酶-SiO2@AuNR水溶液中,20~50℃下避光搅拌8~12h,制备出脲酶驱动的JanusH2-Fe3O4脲酶-SiO2@AuNR-H1纳米探针。

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