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申请/专利权人：深圳赫兹生命科学技术有限公司
摘要：本发明提供了一种猫细小病毒VP2蛋白及所得自主组装病毒样颗粒，属于VLP疫苗领域。本发明提供的猫细小病毒VP2基因具有SEQIDNO.1所示的核苷酸序列。本发明根据大肠杆菌的密码子的偏爱性，人工修饰合成了猫细小病毒VP2基因的DNA序列，应用序列表达的VP2蛋白具有良好的免疫活性，可有效保护宠物猫及猫科动物免受猫瘟病毒侵害。
主权项：1.一种猫细小病毒VP2蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将带有his标签、TrxA促溶标签、NcoI和xhoI酶切位点、TEV酶切位点、G4S连接头以及myc标签的FPVVP2基因片段直接合成到pET28a质粒上，以获得正确的重组质粒pET28a-FPVVP2，其中FPVVP2基因的核酸序列如SEQIDNO:1所示；将收集的重组质粒pET28a-FPVVP2转化到E.coliBL21感受态细胞，挑取单菌落接种至含卡那霉素的LB培养液，37℃摇床培养2h，按照1:100体积比，将培养物接种氨苄青霉素的LB培养基，37℃摇床培养至OD600＝0.6-0.8时加入1mMIPTG，20℃摇床诱导表达9h；4℃4500rpm离心沉淀菌体用Tris-HClpH＝7.4悬浮，冰浴中超声波充分破碎裂解，4℃10000rpm离心20min，收集上清液，加入用50mMTris-HCl平衡好的镍柱中，孵育1h，之后收集流出液，并二次上样；用5倍柱体积的250mM浓度的咪唑洗脱并收集蛋白；将收集的蛋白转移到超滤管中，4℃，3000rmin超滤浓缩，分别取浓缩后蛋白，加入5×蛋白上样缓冲液混匀并变性10min，然后装入透析袋中，以去除咪唑洗脱液，在4℃中进行透析组装制备获得FPVVP2的VLP；透析液为50mMTris、250mMNaCl、pH＝8.0。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 深圳赫兹生命科学技术有限公司 猫细小病毒VP2蛋白及所得自主组装病毒样颗粒
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