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申请/专利权人：东北农业大学
摘要：一种基于杂交链式反应和CRISPRCas12a结合比率荧光快速检测鼠伤寒沙门氏菌的方法及乳制品检测方法，属于食品安全快速检测技术领域。解决了传统方法检测乳制品中鼠伤寒沙门氏菌检测的灵敏度低和结果不准确的问题。它包括一种基于杂交链式反应和CRISPRCas12a结合比率荧光快速检测鼠伤寒沙门氏菌的方法，它主要用于乳制品中的鼠伤寒沙门氏菌检测。
主权项：1.一种基于杂交链式反应和CRISPRCas12a结合比率荧光快速检测鼠伤寒沙门氏菌的方法，其特征在于，所述方法如下：步骤一：将Aptamer和cDNA混合，在95℃下退火5min，然后冷却至室温，获得Aptamer-cDNA复合物；将获得的Aptamer-cDNA复合物加入待测样品中，然后在37℃、180rpm摇床中孵育，获得Aptamer-cDNA和待测样品的混合物；步骤二：将HP1和HP2加入步骤一所述的Aptamer-cDNA和样品的混合物中，然后在37℃、180rpm摇床中振荡孵育，获得HCR；步骤三：将SMBs磁珠悬浮液与1×BW缓冲液在硅化管中混匀，然后将硅化管置于磁架上，静置10s后弃去上清液，获得磁珠；并将磁珠重悬于2×BW缓冲液，获得磁珠重悬液；将获得的HCR与获得的磁珠重悬液混合，在37℃、200rpm摇床中振荡孵育1h，然后置于磁架上，弃去上清液，保留沉淀，用1×BW缓冲液洗涤沉淀三次，获得SMB-HCR复合物；步骤四：将Cas12a与crRNA混合，在37℃的条件下预组装20min，获得Cas12acrRNA复合物；将所述SMB-HCR复合物、Cas12acrRNA复合物和NEBbuffer2.1混合均匀，在37℃、200rpm条件下振荡孵育20min，获得混合物；F-ssDNA-T荧光报告探针加入获得的混合物中，振荡孵育后使用多功能酶标仪测定其在F520nm处和F580nm处的荧光值，根据F520F580判断鼠伤寒沙门氏菌感染情况。
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百度查询： 东北农业大学 一种基于杂交链式反应和CRISPR/Cas12a结合比率荧光快速检测鼠伤寒沙门氏菌的方法及乳制品检测方法
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