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申请/专利权人：陕西未来肉膳健康科技有限公司
摘要：本发明涉及细胞培养技术领域，具体公开了一种将贴壁细胞系驯化为全悬浮细胞系的方法，将贴壁依赖型细胞接种于微载体在含有10％胎牛血清的DMEM培养基中进行细胞增殖，细胞增殖到10E6个mL后裂解微载体，离心并收集细胞团，细胞团接种于含有10％胎牛血清，0.1％剪切力保护剂，2gL葡萄糖的培养基中于30～50转min转速下培养3～4天，使细胞形成50μm～150μm类胚体团；机械吹打类胚体团，使其分散，用含有不同浓度梯度的低分子量葡聚糖硫酸钠的DMEM培养基驯化18～22天获得悬浮驯化成功的细胞系。本发明的方法提高了细胞类胚体的均一性，使类胚体性质更加稳定，能够高效获得悬浮细胞系。
主权项：1.一种将贴壁细胞系驯化为全悬浮细胞系的方法，其特征在于，包括如下步骤：将贴壁依赖型细胞接种于微载体在含有胎牛血清的DMEM培养基中进行细胞增殖，待细胞增殖到10E6个mL～12E6个mL后裂解微载体，离心并收集细胞团；收集的细胞团接种于培养基，于30转min～50转min转速下培养3天～4天，使细胞形成50μm～150μm类胚体团；所述培养基含有体积分数8％～10％胎牛血清，质量分数0.05％～0.1％剪切力保护剂，1.8gL～2gL葡萄糖；机械吹打类胚体团，使其分散，调整转速为50转min～70转min，于38℃～39℃、5％CO2条件下培养3d～4d后开始消化；每3～5天用温和型胰酶消化一次细胞类胚体，调整细胞密度为1E5个mL～6E5个mL，转速为70转min～90转min，消化培养30天～45天，将细胞类胚体分散成3～5个细胞组成的细胞团；然后调整转速为90转min～110转min，用含有20gL～25gL葡萄糖及240mgL～250mgL低分子量葡聚糖硫酸钠的DMEM培养基，监控葡萄糖含量，低于1gL时离心换液，每次换液时重新调整细胞密度为1E5～6E5个mL，筛选出能够适应悬浮环境并正常增殖的细胞群体；梯度降低DMEM培养基中低分子量葡聚糖硫酸钠浓度，驯化18天～22天获得悬浮驯化成功的细胞系。
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百度查询： 陕西未来肉膳健康科技有限公司 一种将贴壁细胞系驯化为全悬浮细胞系的方法
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