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一组降解邻苯二甲酸酯的功能菌群驯化方法 

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申请/专利权人:南京农业大学

摘要:本发明涉及环境污染物生物处理技术领域,具体涉及一组降解邻苯二甲酸酯的功能菌群驯化方法,包括以下步骤:S1、S菌群富集与驯化;S2、S菌群梯度驯化;S3、S菌群菌悬液制备;S4、获取PAEs污染作物;S5、Y菌群富集与驯化;S6、Y菌群菌悬液制备;S7、混合:将步骤S3中得到的S菌群菌悬液与步骤S6中得到的Y菌群菌悬液以3:1的质量比混合,得到强化功能菌群菌悬液。本发明通过回收利用活性污泥并将DMP、DEP、DBP作为唯一碳源和能源进行生长繁殖,得到S菌群菌悬液,可在36h内将初始浓度为10mgL的混合PAEs几乎降解完全,降解率均超过95%,将其应用在有毒有机污染物的生物降解中具有巨大应用潜能。

主权项:1.一组降解邻苯二甲酸酯的功能菌群驯化方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、S菌群富集与驯化:按重量份计,取1~1.5份活性污泥放置于2~3份无机盐培养基中,向所述无机盐培养基中添加PAEs混合溶液,使得无机盐培养基中PAEs的质量浓度为6~14mgL,在室温条件下持续搅拌进行驯化培养3周,得到一次菌悬液,所述活性污泥取自生活污水处理厂二沉池;S2、S菌群梯度驯化:S2-1、将所述一次菌悬液进行转接:取1~1.5份一次菌悬液,加入到2~3份无机盐培养基中,向所述无机盐培养基中添加PAEs混合溶液,在室温条件下持续搅拌进行驯化培养3周,得到二次菌悬液;S2-2、重复步骤S2-1的转接操作五次,并使每次转接后无机盐培养基中PAEs的质量浓度分别对应为40mgL、60mgL、80mgL、100mgL、120mgL,当最后一次转接完成后继续驯化培养3周,得到含有S菌群的六次菌悬液,取出1~1.5份所述六次菌悬液,将其与体积分数为30~40%的甘油按体积比1:1混合,于超低温条件下保存得到含有S菌群的冻干甘油备用;S3、S菌群菌悬液制备:将步骤S2中得到的含有S菌群的冻干甘油用接种环刮取1~1.5份,接种到25~30份灭菌后的LB培养基中,在室温条件下持续搅拌进行活化培养24h,得到初步活化的菌悬液,将所述初步活化的菌悬液置于离心机中离心处理,弃去上清液得到菌体液,用无机盐溶液洗涤菌体液,重复所述离心和无机盐溶液洗涤步骤三次后,将菌体液置于18~20份无机盐培养基中,并将菌体液的OD600值调整到1.0,静置2~3h得到S菌群菌悬液,置于低温条件下保存备用;S4、获取PAEs污染作物:取PAEs污染土壤,向其中加入步骤S3中制备的S菌群菌悬液,PAEs污染土壤与S菌群菌悬液的质量比为100:1,将PAEs污染土壤与S菌群菌悬液混合均匀后静置48h,随后开始在修复后的PAEs污染土壤上进行植物种植,一个种植周期后收获PAEs污染作物;S5、Y菌群富集与驯化:将PAEs污染作物晒干后研磨过200目筛得到PAEs污染作物研磨粉末,取1~1.5份PAEs污染作物研磨粉末放置于2~3份无机盐培养基中,向所述无机盐培养基中添加PAEs混合溶液,使得无机盐培养基中PAEs的质量浓度为6~14mgL,在室温条件下持续搅拌进行驯化培养3周,得到一次强化菌悬液,将所述一次强化菌悬液按照步骤S2中的转接方法转接重复转接五次,得到含有Y菌群的六次强化菌悬液,将其与体积分数为30%的甘油按体积比1:1混合,于超低温条件下保存得到含有Y菌群的冻干甘油备用;S6、Y菌群菌悬液制备:将步骤S5中得到的含有Y菌群的冻干甘油用接种环刮取1~1.5份,接种到25~30份灭菌后的LB培养基中,在室温条件下持续搅拌进行活化培养24h,得到初步活化的强化菌悬液,将所述初步活化的强化菌悬液置于离心机中离心处理,弃去上清液得到强化菌体液,用无机盐溶液洗涤强化菌体液,重复所述离心和无机盐溶液洗涤步骤三次后,将强化菌体液置于18~20份无机盐培养基中,并将强化菌体液的OD600值调整到1.0,静置2~3h得到Y菌群菌悬液,置于低温条件下保存备用;S7、混合:将步骤S3中得到的S菌群菌悬液与步骤S6中得到的Y菌群菌悬液以3:1的质量比混合,得到强化功能菌群菌悬液;所述室温的温度为30℃,所述搅拌的转速为150rpm,所述超低温的温度为-80℃,所述低温的温度为4℃。

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