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一种上海地区草莓脱毒种源繁育与质量控制溯源方法 

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申请/专利权人:上海市农业科学院

摘要:本发明公开了一种上海地区草莓脱毒种源繁育与质量控制溯源方法,包括采集优选单株的匍匐茎、剥取匍匐茎茎尖生长点、生长点培养成苗、原原种驯化、由原原种扩繁原种苗、原种苗扩繁种苗、原种苗种性性状的植物学检验评价、种苗扦插和冷藏、生产苗繁育和种植户应用和反馈,形成一套全程无激素培育、由草莓微茎尖直接成苗的脱毒技术体系,避免瓶内扩繁的组培变异风险;提高脱毒原原种扩繁安全性和效率,避开夏季高温高湿阶段扦插繁育,减少病害防控压力,降低脱毒种苗繁育成本;同时形成一套可操作性强的草莓脱毒种苗质量控制技术,提高种苗质量控制和监管水平,在种苗溯源末端引入种苗用户质量评价环节,形成种苗繁育产业自我成长健康发展机制。

主权项:1.一种上海地区草莓脱毒种源繁育与质量控制溯源方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、采集优选单株的匍匐茎,包括:对上海地区草莓种质资源圃或已繁殖的原种圃核心种源大棚进行编号,录入编号信息到草莓种苗溯源系统并生成编号二维码,打印并贴于对应的草莓核心种源大棚内,在核心种源大棚内种植计划品种的草莓苗作为核心种源,春天开始抽生匍匐茎;对生长健壮植株保留匍匐茎,选择符合该品种标准特性的植株,第一年3-8月采集匍匐茎,扫描所述编号二维码读取信息,录入草莓品种名称、采集批次、采集日期、匍匐茎采集人员信息到草莓种苗溯源系统并生成二维码A,打印并贴于采集好的每一个匍匐茎外包装袋上;S2、剥取匍匐茎茎尖生长点,包括:扫描所述二维码A读取信息,取出采集好的匍匐茎,去除已展开叶片,刷洗茎尖,截取3-4cm长的顶端流水冲洗并表面消毒,在双目体式显微镜下由外向内用尖头镊子逐层剥去幼叶原基,切取0.1-0.3mm大小的茎尖生长点,并将茎尖剥取人员、剥取日期信息人工录入到草莓种苗溯源系统中;S3、生长点培养成苗,包括:所述茎尖生长点接种于MS萌发培养基上,录入MS萌发培养基配方到草莓种苗溯源系统并生成二维码B,打印并贴在装有培养器皿的框上;于25℃暗处理诱导培养3-7天,将萌发出的小芽转移到弱光下培养生长2-4周,更换MS无激素壮苗培养基,扫描所述二维码B读取信息,录入培养基更换人员、更换日期、MS无激素壮苗培养基配方信息到草莓种苗溯源系统中生成二维码C,打印并贴在装有培养器皿的框上;在正常光照下继续培养4-8周壮苗,转移到12MS生根培养基上于23-25℃、每日光照16h的条件下诱导生根,扫描所述二维码C读取信息,录入培养基更换人员、更换日期、12MS生根培养基配方信息到草莓种苗溯源系统中生成二维码D,打印并贴在装有生根培养基器皿的框上;S4、原原种驯化,包括:出瓶前对全部微茎尖成的苗进行病毒检测和品种纯度检测,标记每一株微茎尖形成的苗,取瓶苗叶片提取核酸进行病毒分子检测和品种身份的SSR检测,剔除品种纯度和病毒脱除不符合质量标准的苗;扫描二维码D读取信息,录入核酸提取人员、提取日期、病毒检测人员、检测日期、病毒检测结果及相应报告、品种检测人员、检测日期、品种检测结果及相应报告信息到草莓种苗溯源系统中生成二维码E,打印并贴在装有原原种培养瓶的框上;检测后无毒、品种纯正的植株于当年11月-次年1月出瓶,洗净培养基,在远离生产区的隔离双层60目网室中,在穴盘填充草炭和珍珠岩以3:1体积比混合的新基质,pH6.5-7.0,EC小于0.6Scm,将无毒幼苗移植到基质中,浇足定根水,进行原原种炼苗;扫描二维码E读取信息,录入移苗日期、移苗人员信息到溯源系统中生成二维码F,打印并重新贴在每一个穴盘上;定植1周后,移去保湿薄膜,适时浇水,保持基质含水量在65%-70%;定植后15天,每株浇灌MS营养液10mL;定植后第3周开始,每周使用草莓幼苗专用营养配方肥浇灌,以每株浇灌10-20mL为度;定植后第7-8周,子苗高度达到15cm、基质外可见新生根,获得脱毒原原种穴盘苗;S5、由原原种扩繁原种苗,包括:第二年2月-4月上旬,日均温在10℃以上时,在同一隔离防虫网室中选另一区域,将无病毒健壮脱毒原原种穴盘苗定植于苗床上,填充商品化育苗专用基质,营养液供给采用所述草莓幼苗专用营养配方肥与高氮型三元复合肥交替使用,EC值控制在0.6-1.0Scm、pH5.8-6.5之间;扫描二维码F读取信息,录入定植日期、定植地点、定植人员信息到溯源系统中,同时添加一个4位数的自动编号字段生成二维码G,打印并贴在每一株原原种旁;正常养护到4月开始大量抽生匍匐茎,在生出3节的子苗时开始引插,第二年6月下旬一次性剪下根系发育良好的匍匐茎子苗,每一原原种母株至少繁殖获得原种引插苗10-30株,对应原原种母株溯源标记每一株原种苗;引插苗脱离母株后剥近地老叶,用一次防病药,浇一次发根腐殖酸水;分离引插苗时依次扫描二维码G读取信息,录入引插苗脱离母株日期、操作人员信息到溯源系统中生成二维码H,打印并贴在每一株原种引插苗的穴盘或营养钵托盘上;S6、原种苗扩繁种苗,包括:第二年6月底-7月初,在清洁繁苗网室的高架基质槽内定植原种苗;定植时依次扫描二维码H读取信息,录入原种苗定植日期、定植人员信息到溯源系统中生成二维码I,打印并贴在每一株原种定植高架基质槽边,通过保温和肥水管理,于10-11月产生大量匍匐茎,结合肥水差异化管理并疏花,保持其营养繁殖能力;S7、原种苗种性性状的植物学检验评价,包括:第二年9月中旬,对每一株原原种苗均取一株原种苗到鲜果生产大棚测试,观察其植物学特性和开花结果特性,至11月下旬-12月上旬判断是否合格,根据生产棚中植物学和果实特性检验结果,剔除所有来自同一原原种株的变异原种苗及该原原种,保留通过检验的原种苗姊妹植株及其匍匐茎,扫描二维码I读取信息,录入品种开花结果特性检验信息、特性检验人员信息到溯源系统中生成二维码J,打印并贴在每一块原种苗定植基质槽边;S8、种苗扦插和冷藏,包括:第二年11月下旬-12月上旬,从通过花果和植物学特性检验的原种苗上剪下匍匐茎子苗集中扦插获得种苗,一株原种苗繁殖20-50株种苗,扫描每一株原种苗的二维码J读取信息,录入种苗扦插时间、种苗扦插负责人员信息录入到溯源系统中生成二维码K,打印并贴在按照原原种划分好的种苗培育区域边,至此一个单茎尖经组培脱毒再驯化发展为一株原原种、基质中二次繁殖,历经16-21个月获得200-1000株种苗;种苗扦插成活后,冬季在避免冷害的前提下常开顶膜和侧膜,或利用冷库0-5℃冷藏保持其处于休眠状态,减少植株生长和花诱导;种苗出圃前,根据清洁度分级,10%抽检病毒和品种纯度,扫描二维码K读取信息,录入种苗质量检测时间、检测负责人员、检测结果信息到溯源系统中生成二维码L,打印并贴在种苗的外包装上;S9、生产苗繁育,包括:第三年3月,选清洁的水稻田块或新基质定植种苗以繁育生产苗,扫描二维码L读取信息,录入生产苗繁育日期、地点、繁育负责人员信息到溯源系统中生成二维码M,打印并贴在划分好的生产苗繁育地块或基质槽边;至9月,以1:40繁殖系数计,每一株原原种至第三年获得脱毒商品化生产苗0.8-4万株,生产苗按比例抽检,扫描二维码M读取信息,录入生产苗病虫害检测结果、病虫害检测负责人员、生产苗出圃日期、生产苗出圃质量负责人员信息到溯源系统中生成二维码N,打印并贴在出售生产苗的外包装袋上,草莓种植户购买草莓生产苗后,扫描二维码N读取信息;S10、种植户应用和反馈,包括:草莓种植户将购买到的草莓生产苗移栽到大棚中进行栽培生产,同时将二维码N封装到大棚大门边进行保存,待定植15天后根据生产苗成活率,种植户扫描二维码N,针对草莓生产苗成活率进行第一次0~100分评分;在草莓初花期,种植户再次扫描二维码N,对此批次草莓抗性和早熟性进行第二次0~100分评分;在草莓盛果期,种植户再次扫描二维码N,对该批次草莓总体表现进行第三次0~100分评分;草莓种苗生产企业根据种植户的评分反馈对后期的草莓种苗生产进行改进。

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