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一种条件性多重QPCR方法 

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申请/专利权人:苏州海苗生物科技有限公司

摘要:本发明公开了一种条件性多重QPCR方法,QPCR扩增体系针对每个DNA样本包括一组条件性引物1和2,正向条件性引物1和2与模板链配对,反向条件性引物1和2与模板链的互补链配对,条件性引物2位于条件性引物1的下游,条件性引物2的5’端连接待测DNA片段的扩增引物,且扩增引物不与条件性引物2与模板链结合的上游序列配对。本发明所述方法只有同时满足条件性引物1和2均与模板链结合且条件性引物1延伸至条件性引物2的5’端条件时,DNA聚合酶将条件性引物2的5’端游离的待测DNA片段的扩增引物剪切至扩增系统中。本发明所述方法降低了待测DNA片段的扩增引物与其它不同DNA样本发生不必要的配对的可能性,提高了扩增反应的特异性。

主权项:1.一种条件性多重QPCR方法,其特征在于:QPCR扩增体系针对每个DNA样本包括一组条件性引物1和2,正向条件性引物1和2与模板链配对,反向条件性引物1和2与模板链的互补链配对,条件性引物2位于条件性引物1的下游,条件性引物2的5’端连接待测DNA片段的扩增引物,且扩增引物不与条件性引物2与模板链结合的上游序列配对;QPCR包含:程序1:1在变性温度下,DNA样本变性得到DNA单链模板;2在退火温度下,条件性引物1和2与DNA单链模板结合;3在延伸温度下,由条件性引物1向条件性引物2延伸扩增,当延伸至条件性引物2的5’端时,DNA聚合酶切割条件性引物2的5’端,释放待测DNA片段的扩增引物;程序2:1在变性温度下,DNA样本变性得到DNA单链模板;2若DNA样本存在待测DNA片段序列,扩增引物在退火温度下与DNA单链模板结合;3在延伸温度下,扩增引物延伸、扩增得到待测DNA片段。

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