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申请/专利权人：北京亿森宝生物科技有限公司

摘要：本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种鸡新城疫病毒检测试剂盒及应用。本发明提供的试剂盒包被的抗原蛋白为HN重组蛋白，其对于检测各种基因型的新城疫具有较好的特异性，能够更准确的检测出抗体水平。另外，本发明还建立了以HN蛋白为包被抗原的用于鸡新城疫病毒检测的化学发光免疫分析方法，该方法无背景荧光，可以在很宽的线性范围内检测极低浓度的分析物，对目标抗体的检测具有更准确、更高敏感性、更高效的优点。随着越来越多的疫苗接种预防，本发明提供的试剂盒及检测方法对于检测养殖场中新城疫的抗体水平及对预防和控制新城疫的发生和流行具有重要意义。

主权项：1.检测试剂盒，其特征在于，包括包被液、抗原包被板、酶标二抗、样品稀释液、阳性对照血清、阴性对照血清、发光底物和洗涤液；所述包被液以pH值为9.2-9.8的碳酸盐缓冲液为基础溶剂，添加的抗原为0.9-1.1μgml的鸡新城疫病毒HN蛋白；所述HN蛋白通过SEQIDNO.1所示核苷酸序列的基因表达得到；所述酶标二抗为辣根过氧化物酶标记的山羊抗鸡IgG抗体，稀释倍数为1:10000；所述样品稀释液为含有山羊血清和ProClin300的PBST；以PBST的体积为100vol%计，山羊血清的含量为4-6vol%，ProClin300的含量为0.05-0.07vol%；所述发光底物包括发光底物A和发光底物B；所述发光底物A以pH值为7.5-8.5、浓度为0.04-0.06molL的Tris缓冲液为基础溶剂，添加0.08-0.12mmolL的鲁米诺和0.08-0.12gL的羟基香豆素；所述发光底物B以pH值为5.0-5.5、浓度为0.04-0.06molL的醋酸铵溶液为基础溶剂，添加0.06-0.08mmolL的维生素C和2.7-3.3mmolL的氨基酸氧化酶；所述洗涤液以10倍浓缩计，包括0.018-0.022molL的磷酸二氢钠、0.07-0.09molL的磷酸氢二钠、1.29-1.45molL的氯化钠和0.4-0.6vol%的Tween-20；所述洗涤液以10倍浓缩计，pH值为7.3-7.5；所述HN蛋白为重组蛋白，将上述HN蛋白基因插入到pGEX-KG载体中，转化至大肠杆菌进行表达，其表达条件：IPTG浓度为0.8mmolL，20℃诱导8h。

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