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申请/专利权人：山东玄康种业科技有限公司
摘要：本发明适用于作物遗传育种应用领域，提出了一种番茄单倍体诱导系的制备方法及应用，包括如下步骤：敲除CenH3基因，得到转基因番茄一；表达互补CenH3基因缺失的融合蛋白，得到转基因番茄二；将转基因番茄一和转基因番茄二杂交获得的后代再自交，得到番茄单倍体诱导系；将番茄单倍体诱导系或其后代进行自交，或者作为母本与其他番茄材料杂交，得到番茄单倍体。综上，本发明的番茄单倍体诱导系的制备方法可产生单倍体诱导系，为拓展单倍体育种技术在番茄上的应用奠定重要基础，为番茄的种质创新和新品种选育提供了新策略。
主权项：1.一种番茄单倍体诱导系的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一设计番茄CenH3基因的敲除靶序列，靶位点位于SEQIDNo.1CenH3基因的第20-40位，靶序列为CGCGAAACGAAGTCGCACCASEQIDNo.3；将U6启动子元件、sgRNA表达元件及所述靶序列连接到线性基础载体pBGK012-35S-Cas9后，得到重组载体，将所述重组载体导入番茄中，得到转基因番茄一；步骤二通过重叠PCR将番茄CenH3基因前2000bp、GFP片段、SEQIDNo.2番茄H3.3的基因序列第1-129位、SEQIDNo.1CenH3的基因序列第145-435位、NOS终止子成功连接为CenH3Pro-GFP-Tail-HFD-NOS的互补片段，即CenH3-tailswap；将所述互补片段连接到经限制性内切酶HindⅢ和EcoRⅠ双酶切切除Cas9表达元件的pBGK012-35S-Cas9线性载体后，得到重组载体，将所述重组载体导入番茄中，得到转基因番茄二；步骤三将所述转基因番茄一和转基因番茄二杂交获得的后代再自交，得到番茄单倍体诱导系；步骤四将所述番茄单倍体诱导系或其后代进行自交，或者将所述番茄单倍体诱导系作为母本与其他番茄材料杂交，得到的自交后代或杂交后代，即为番茄单倍体植株。
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百度查询： 山东玄康种业科技有限公司 一种番茄单倍体诱导系的制备方法及应用
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