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申请/专利权人：浙江大学
摘要：本发明公开了一种活细胞核糖体RNA可视化系统及其用途。具体地说，本发明建立了一个靶向rRNA生成的高效筛选系统，该筛选系统基于本发明新开发的活细胞rRNA荧光报告分子。该系统和传统的筛选策略相比，能够极大简化筛选流程，节省筛选时间，因此显著地提高了筛选效率。
主权项：1.一种基因工程细胞在筛选药物中的应用，其特征在于，所述基因工程细胞的rDNA中整合有外源DNA序列，所述外源DNA序列编码RNA标记序列，在rDNA转录时所述RNA标记序列成为rRNA的一部分；所述外源DNA序列在所述rDNA的插入位点为5.8S区域；所述基因工程细胞还表达与所述RNA标记序列特异性结合的融合蛋白，所述融合蛋白的编码基因如SEQIDNo.12或SEQIDNo.13所示；基于CRISPR-Cas9的基因编辑系统，采用同源臂介导的DNA修复或者非同源臂介导的DNA修复方式把所述外源DNA序列插入到rDNA的5.8S区域，进而标记rRNA；所述外源DNA序列如SEQIDNo.1所示；其中，采用同源臂介导的DNA修复方式，把如SEQIDNo.2所示的修复模板序列插入到rDNA的5.8S区域；或者，采用非同源臂介导的DNA修复方式，把如SEQIDNo.3所示的修复模板序列插入到rDNA的5.8S区域；用于靶向插入5.8S区域的CRISPRsgRNA序列如SEQIDNo.8所示；用于靶向修复模板质粒线性化的CRISPRsgRNA序列如SEQIDNo.11所示；所述筛选药物的步骤包括：i将待筛选化合物与所述的基因工程细胞接触，以及ii观察所述基因工程细胞细胞核内的指示rRNA表达量的荧光强度；如果荧光强度降低说明该化合物具有潜在抑制细胞增殖活性，如果荧光强度升高说明该化合物具有潜在抑制rRNA剪切或促进rRNA转录的活性。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 浙江大学 活细胞核糖体RNA可视化系统及其用途
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