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申请/专利权人：广州达安基因股份有限公司

摘要：本申请实施例属于高通量测序技术领域，涉及一种基于已知标签的内参进行高通量测序的方法，包括：生成随机的DNA序列，并在所述DNA序列两端添加含有已知标签的单端接头DNA序列，获得内参序列，基于所述内参序列合成测序质控序列；通过所述测序质控序列对待测样本文库进行高通量测序，获得测序数据；对所述测序数据进行结果分析，获得所述待测样本文库的样本错误分配率，结束所述高通量测序。本申请能够通过内参监控测序过程中标签跳跃的情况。

主权项：1.一种基于已知标签的内参进行高通量测序的方法，其特征在于，包括下述步骤：生成随机的DNA序列，并在所述DNA序列两端添加含有已知标签的单端接头DNA序列，获得内参序列，基于所述内参序列合成测序质控序列；通过所述测序质控序列对待测样本文库进行高通量测序，获得测序数据；对所述测序数据进行结果分析，获得所述待测样本文库的样本错误分配率，结束所述高通量测序；所述随机的DNA序列为噬菌体序列或植源型病原体序列，其中，所述噬菌体序列和所述植源型病原体序列均为非致病病原体的基因序列；所述生成随机的DNA序列的步骤包括：通过特异物种的筛选算法，选择非致病病原体的基因序列；将选择的序列切割成预设大小，并比对病原数据库和宿主数据库，若病原数据库和宿主数据库中不存在选择的所述序列，则所述序列作为所述随机的DNA序列，其中，所述预设大小为150bp，生成的所述随机的DNA序列的大小为所述待测样本文库的样本片段的大小减去两个所述单端接头DNA序列的大小；所述基于所述内参序列合成测序质控序列的步骤包括：将所述内参序列克隆至puc57载体中，获得所述测序质控序列；所述通过所述测序质控序列对待测样本文库进行高通量测序，获得测序数据的步骤包括：通过指定的PCR扩增引物扩增所述测序质控序列，获得目标测序质控序列；通过所述目标测序质控序列对所述待测样本文库进行高通量测序，获得所述测序数据；所述通过所述目标测序质控序列对所述待测样本文库进行高通量测序，获得所述测序数据的步骤包括：确定添加所述目标测序质控序列的量，获得添加量，并将所述目标测序质控序列根据所述添加量加入所述待测样本文库中，获得混合文库；对所述混合文库进行高通量测序操作，获得所述测序数据。

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