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申请/专利权人:云南农业大学
摘要:本发明涉及生物防治技术领域,具体涉及一种基于感受态芽孢与根瘤农杆菌共孵育的莱氏绿僵菌遗传转化方法及应用,本发明通过根癌农杆菌的转化成功将莱氏绿僵菌菌株SZCY201010中NOR_03501基因敲除。通过感受态芽孢与根瘤农杆菌共孵育,将挑选的转化子的成功转化率提高到54%NOR_03501。同时,本发明对比了分生孢子、芽孢、冻存芽孢、芽生孢子和感受态芽孢的转化率,确定了利用感受态芽孢的遗传转化率是最高的。最后,还利用PCR、激光共聚焦荧光快速筛查、RT‑qPCR技术对真菌的转化子进行验证,验证了本技术的可靠性。
主权项:1.一种基于感受态芽孢与根瘤农杆菌共孵育的莱氏绿僵菌遗传转化方法,其特征在于,包括以下步骤:S1:构建二元载体:将目的基因NOR_03501与适配莱氏绿僵菌的载体连接,构建稳定的二元载体;S2:根瘤农杆菌转化:利用根瘤农杆菌介导基因传递的方法,将二元载体导入莱氏绿僵菌感受态孢子中;S3:感受态芽孢制备:分别用分生孢子、酵母态芽孢、冻存的酵母态芽孢、芽孢、感受态芽孢5种孢子在培养基中培养转化后的感受态孢子,促使其形成真菌的营养菌丝;S4:真菌遗传转化及比较:将感受态孢子接种在培养基上,实现外源基因在莱氏绿僵菌基因组中的稳定转化;比较不同无性孢子形态对转化效率的影响,筛选出高效的无性孢子。
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权利要求:
百度查询: 云南农业大学 一种基于感受态芽孢与根瘤农杆菌共孵育的莱氏绿僵菌遗传转化方法及应用
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