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申请/专利权人：云南农业大学
摘要：本发明涉及一种通过秋水仙素诱导多倍体猪的方法。本发明针对二倍体猪成纤维细胞系，利用不同浓度的秋水仙素诱导，通过检测不同浓度诱导后的细胞倍性变化，筛选最佳的秋水仙素浓度，进一步诱导生产多倍体猪细胞系，以此为体细胞核移植的核供体构建猪多倍体克隆胚，再进行胚胎移植生产四倍体猪。本发明首次将秋水仙素成功应用于猪多倍体的诱导中，对促进多倍体猪的生产及育种应用研究具有重要的意义。
主权项：1.一种通过秋水仙素诱导多倍体猪的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1）秋水仙素诱导最佳浓度的筛选将猪胎儿成纤维细胞传代至对数生长期，持续4天分别通过0.05~0.2µgmL的秋水仙素处理后，检测不同浓度的细胞倍性情况和染色体数目，再根据四倍性所占比例的大小筛选秋水仙素处理诱导的最佳浓度；所述最佳浓度为0.2µgmL；所述猪胎儿成纤维细胞为二倍体；2）秋水仙素诱导体系的优化将猪胎儿成纤维细胞传代至对数生长期，经上步所述最佳浓度的秋水仙素处理后，将被处理的靶细胞采用抖落法收集细胞沉淀后，再继续利用秋水仙素诱导处理，进一步降低处理后二倍性细胞残留的比例；其中第一次秋水仙素处理的时间为17小时，第二次秋水仙素处理的时间为3天；所述猪胎儿成纤维细胞为二倍体；3）多倍体细胞的筛选与纯化将经秋水仙素处理后的细胞群进行单细胞克隆极度稀释培养，单细胞克隆经细胞倍性检测后，再进行细胞核型分析，获得多倍体猪细胞系；4）多倍体细胞系的克隆及胚胎移植以筛选纯化获得的四倍体细胞系为核供体进行体细胞克隆，检测克隆胚发育能力后进行胚胎移植，以进一步生产多倍体猪。
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权利要求：
百度查询： 云南农业大学 一种通过秋水仙素诱导多倍体猪的方法
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