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申请/专利权人:丽山健康(山东)集团有限公司;山东丽山生物科技有限公司
摘要:本发明涉及细胞培养技术领域,具体提供了一种CAR‑T细胞应用方法:无菌环境下,在100uL的CAR‑T细胞注射液中加入1.8~2.2倍质量的中药提取物并混匀后静脉注射入带瘤裸鼠体内。本发明特定配比的雷公藤、黄芩、粉防己、芍药和枸杞子对CAR‑T细胞应用造成的IL‑6炎性因子的过度表达有协同的调节效果。
主权项:1.一种CAR-T细胞注射液的优化方法,其特征在于,所述CAR-T细胞注射液的优化方法为:无菌环境下,在100uL的CAR-T细胞注射液中加入1.8~2.2倍质量的中药提取物并混匀;所述中药提取物的制备方法如下:取干制的质量份数为15~19%的雷公藤、质量份数为20~26%的黄芩、质量份数为14~18%的粉防己、质量份数为18~23%的芍药、质量份数为8~12%的枸杞子和补足余量的纯水,以50目细度粉碎,加15倍质量的水回流提取4次,每次50min,100目过滤后,将滤液83℃且0.3MPa第一次减压蒸馏10min;收集剩余物加10倍质量的85%乙醇,混匀后静置5h,100目过滤收集滤液,76℃且0.3MPa第二次减压蒸馏回收乙醇至不再流出,收集剩余物得中药膏;将所述中药膏调节pH值至6.0,用大孔树脂柱进行吸附,上液量流速为2.7BVh,收集尾液,然后用60%乙醇洗脱,洗脱液用量为2BV,流速为2.2BVh,收集洗脱液,80℃且0.3MPa第三次减压蒸馏20min后,收集剩余物按0.005gmL加入注射用活性炭,煮沸45min,冷却至30℃时,通过钛棒过滤器过滤,加注射用生理盐水稀释至5倍质量,115℃灭菌30min得所述中药提取物。
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