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申请/专利权人：武汉大学
摘要：本发明提供了一种基于Spacer基因定向插入TC‑Tag标签的细胞系、重组病毒及其制备方法与应用，将载体pCDN3.1‑CMV‑G418通过SacIPmeI双酶切获得线性化片段；将SEQIDNO.4‑SEQIDNO.5所示引物和SEQIDNO.6‑SEQIDNO.7所示引物对D型HBV1.3倍体质粒扩增获得片段1和片段2，后与所述线性化片段通过无缝克隆获得重组质粒，经ScaI单酶切获得线性质粒转染肝癌细胞，通过抗性筛选获得基于Spacer基因定向插入TC‑Tag标签的具有复制能力的细胞系。源于该细胞模型可获得具有复制感染能力的新型重组病毒，可完成病毒的整个生活周期及相关病毒感染过程的可视化。
主权项：1.一种基于Spacer基因定向插入TC-Tag标签的HBV重组病毒的细胞系的制备方法，其特征在于，所述方法包括：将载体pCDN3.1-CMV-G418通过SacIPmeI双酶切，获得线性化载体骨架片段；将SEQIDNO.4-SEQIDNO.5所示引物和SEQIDNO.6-SEQIDNO.7所示引物对D型HBV1.3倍体质粒进行扩增，分别获得片段1和片段2；将所述线性化载体骨架片段、片段1和片段2通过同源重组和转化，获得重组质粒pCDN3.1-CMV-HBV1.3-TC-G418；将所述重组质粒pCDN3.1-HBV1.3-TC-G418经ScaI单酶切获得线性化片段，后转染HepG2细胞并通过G418抗性筛选，获得多克隆细胞系；将所述多克隆细胞系通过G418抗性筛选，获得基于Spacer基因定向插入TC-Tag标签的细胞系。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 武汉大学 基于Spacer基因定向插入TC-Tag标签的细胞系、重组病毒及其制备方法与应用
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