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申请/专利权人：昆明理工大学

摘要：本发明公开重组表达凋亡素蛋白的溶瘤流感病毒的制备方法及应用，具体公开了构建表达凋亡素蛋白的溶瘤流感病毒的步骤及在肿瘤治疗中的应用。具体为定向改造甲型流感病毒的PB2节段，使其表达鸡传染性贫血病毒Chickeninfectiousanemiavirus，CAV的VP3蛋白凋亡素蛋白，apoptin。包含如下步骤：将apoptin蛋白的单链编码基因构建到病毒的PB2片段的3’NCR区，其可促进肿瘤细胞的凋亡及焦亡，募集NK、T细胞等免疫细胞，进一步激活免疫微环境，发挥治疗作用。对结直肠癌的治疗尤为有效。本发明提供的重组溶瘤流感病毒可靶向杀伤肿瘤细胞，对正常宿主细胞无明显影响，可用于肿瘤靶向治疗。

主权项：1.表达凋亡素的重组溶瘤流感病毒在制备治疗直肠癌药物中的应用，其特征在于，所述重组溶瘤流感病毒表达名称为Apoptin的蛋白质，Apoptin为经过优化过的利于在真核细胞中表达的氨基酸序列是如SEQIDNO.1所示的蛋白质，由SEQIDNO.2所示的第2538-2903位核苷酸编码；所述表达凋亡素的重组溶瘤流感病毒通过包括如下步骤的制备方法进行制备：将鸡传染性贫血病毒的VP3蛋白（凋亡素蛋白，apoptin）通过病毒拯救，得到表达凋亡素蛋白的重组病毒；所述重组溶瘤流感病毒的基因组为单股负链、分节段的RNA，所述重组溶瘤流感病毒的负链RNA转录出与负链RNA互补的成套正链RNA，所述成套正链RNA包括segment1-RNA、segment2-RNA、segment3-RNA、segment4-RNA、segment5-RNA、segment6-RNA、segment7-RNA、segment8-RNA；所述segment1-RNA为编码所述流感病毒毒株中PB2和apoptin的RNA；所述segment2-RNA为编码所述流感病毒毒株中PA的RNA；所述segment3-RNA为编码所述流感病毒毒株中PB1的RNA；所述segment4-RNA为编码所述流感病毒毒株中NP的RNA；所述segment5-RNA为编码所述流感病毒毒株中NP的RNA；所述segment6-RNA为编码所述流感病毒毒株中NA的RNA；所述segment7-RNA为编码所述流感病毒毒株中的M的RNA；所述segment8-RNA为编码所述流感病毒毒株中NP的RNA；所述的segment1-RNA从5’端起依次表达所述病毒基因组中PB2、GSGlinker序列、P2A自剪切序列、apoptin序列；治疗直肠癌药物，包括所述重组溶瘤流感病毒或相关的活性成分。

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