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申请/专利权人：上海百趣生物医学科技有限公司
摘要：本发明揭示了一种快速高效用于定位多肽内部复杂的嵌套式二硫键的鉴定方法，能够有效的应用于生物医药领域蛋白和多肽的结构表征。是一种新型的衍生裂解结合高分辨质谱的二硫键鉴定方法。包括以下步骤：（1）将待测多肽与二硫键还原剂在酸性溶液环境中反应得到部分还原产物；（2）将部分还原产物通过衍生化试剂对被还原的游离巯基衍生化后并在碱性条件下发生裂解。（3）利用超高效液相色谱串联高分辨质谱对裂解片段进行匹配和鉴定。根据裂解肽片段的断裂位点确定二硫键的连接。能快速准确的鉴定包含三对及三对以上且含有临位半胱氨酸的复杂交错式二硫键的连接，方法稳定性好，对仪器种类要求低，便于操作和数据解析，且所需的样品量少，成本低。
主权项：1.一种快速高效定位多肽内复杂二硫键连接的方法，包括：1样品部分还原：将待测样品与三2-羧乙基膦TCEP在酸性条件下于25℃恒温静置反应10min进行部分还原处理，得到样品的部分还原产物；2部分还原样品衍生化：将部分还原产物与1-氰基-4-二甲氨基吡啶四氟硼酸酯CDAP在酸性条件下进行氰基衍生化反应,使被还原的那对二硫键的半胱氨酸Cys的S原子衍生化连上1个氰基生成-SCN；3衍生化裂解：将衍生化的部分还原产物在含有二硫键还原剂TCEP的碱性条件下发生衍生化裂解，连有氰基的半胱氨酸Cys左侧断裂形成新的五元环；4用超高效液相色谱串联高分辨质谱对样品化学裂解肽片段进行检测分析，根据发生衍生化裂解的半胱氨酸Cys的位置定位样品中被还原的二硫键，确定二硫键的连接形式；5补充说明：本研究同时会对样品完整分子量和完全还原分子量进行分析，确认样品内部实际二硫键连接对数和样品是否形成聚体；所述的酸性条件均采用10%FA进行快速调节，二硫键在酸性条件下稳定；碱性条件采用1molLNH3·H2O溶液调节。
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百度查询： 上海百趣生物医学科技有限公司 一种快速高效定位多肽内复杂二硫键连接的方法
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