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一种人结肠癌旁类器官/结肠癌类器官和肿瘤相关成纤维细胞共培养模型的构建方法 

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申请/专利权人:广州中医药大学(广州中医药研究院)

摘要:本发明公开了一种人结肠癌旁类器官结肠癌类器官和肿瘤相关成纤维细胞共培养模型的构建方法。本发明利用分离隐窝细胞后的人体结肠癌组织提取肿瘤相关成纤维细胞,再将肿瘤相关成纤维细胞与结肠癌旁类器官结肠癌类器官进行共培养,建立了快速、简单、有效的体外共培养模型。本发明的构建方法可以最大化利用样本,缩短实验时间,较充分地保持肿瘤相关成纤维细胞及肿瘤的异质性,能更好地模拟患者病理状态,为成纤维细胞与结肠干细胞结肠癌干细胞的相互作用提供研究平台,有助于结肠癌结肠腺瘤结肠息肉的启动、发生发展的病理机制研究及药物筛选、新药研发的体外研究。

主权项:1.一种肿瘤相关成纤维细胞的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:S11.收集分离隐窝细胞后残余的结肠癌组织;S12.加入预冷含双抗的DPBS溶液,吹打后静置25~35s,收集上清液;加入预冷含双抗的DPBS溶液,吹打后静置25~35s,分别收集上清液和残余组织;S13.将两次收集的上清液合并,离心后取沉淀,得到肿瘤相关成纤维细胞组分1;S14.向步骤S12得到的残余组织中加入预冷含双抗的DPBS溶液,吹打后静置25~35s,分别收集混悬液和残余组织,将混悬液离心取沉淀,得到肿瘤相关成纤维细胞组分2;S15.向步骤S14得到的残余组织中加入预冷含双抗的DPBS溶液,离心取组织沉淀;S16.向组织沉淀中加入消化液进行消化,消化后静置25~35s,收集混悬液并终止消化;重复此操作2~5次,将收集的混悬液合并,离心取沉淀,得到肿瘤相关成纤维细胞组分3;S17.将步骤S13得到的肿瘤相关成纤维细胞组分1、步骤S14得到的肿瘤相关成纤维细胞组分2和步骤S16得到的肿瘤相关成纤维细胞组分3分别进行培养和第一次纯化,然后将第一次纯化后的三种肿瘤相关成纤维细胞组分充分混匀,继续进行传代和后续纯化,即得肿瘤相关成纤维细胞。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 广州中医药大学(广州中医药研究院) 一种人结肠癌旁类器官/结肠癌类器官和肿瘤相关成纤维细胞共培养模型的构建方法

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