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一种单细胞转录组测序方法及其应用 

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申请/专利权人:浙江大学

摘要:本发明提供了单细胞转录组测序方法及其应用,所述方法包括:将待测细胞样本制备成单细胞悬液后用固定液固定;和使用反转录引物在固定后的单个细胞的RNA上进行原位反转录反应合成cDNA第一条链。

主权项:1.一种单细胞转录组测序方法,其特征在于,所述方法包括:将待测细胞样本制备成单细胞悬液后用固定液固定;使用反转录引物在固定后的单个细胞的RNA上进行原位反转录反应合成cDNA第一条链;在反转录获得的cDNA第一条链的尾端加上捕获接头,所述捕获接头与编码微球上的捕获接头互补链的序列互补;所述捕获接头是已知序列的任意片段;在加上所述捕获接头后将所述单个细胞和单个所述编码微球包含在单个腔室中以形成单细胞分隔并在所述单个腔室中合成cDNA第二条链;和在合成所述cDNA第二条链后对双链cDNA进行PCR扩增及建库和测序;其中所述反转录引物是反转录随机引物;所述方法使用的编码微球上的单链DNA中包含上游扩增引物互补片段、条形码、UMI和捕获接头互补链;所述条形码用于对同一细胞中的cDNA进行标记;所述UMI用于标记每一个原始cDNA;所述的cDNA第二条链含有上游扩增引物互补片段、条形码、UMI、捕获接头互补链以及cDNA序列;所述单细胞转录组测序方法不是诊断方法或治疗方法。

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