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申请/专利权人:华中农业大学
摘要:本发明公开了ORF7b基因缺失的猫传染性腹膜炎减毒病毒及构建方法和应用,属于疫苗技术领域,本发明使用CRISPRCas9介导的同源重组技术,在反向遗传操作平台的基础上,将质粒pBAC‑QS‑79S的ORF7b区域替换为Nanoluc序列,随后对毒株进行拯救,从而构建出ORF7b基因缺失减毒病毒。通过对该毒株生长特性、致病性以及免疫保护效果进行测定,证实了ORF7b基因的缺失不影响病毒增殖,但使得毒株失去了致病性;同时免疫保护实验结果显示,采用皮下免疫接种减毒病毒,免疫组中80%的猫在暴露于强毒株后一个月仍然存活,证实了该减毒病毒对猫传染性腹膜炎强毒株有理想的保护效果,提高了临床应用价值。
主权项:1.一种ORF7b基因缺失的猫传染性腹膜炎减毒病毒的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:将质粒pBAC-QS-79S的ORF7b区域替换为报告基因序列,之后对猫传染性腹膜炎病毒进行拯救,形成ORF7b基因缺失的猫传染性腹膜炎减毒病毒;所述质粒pBAC-QS-79S是将FIPV-QS毒株的全长基因组序列导入BAC质粒中,再将Spike区域替换为FIPV-791146毒株的Spike片段;所述FIPV-QS毒株的全长基因组序列在GenBank的登录号为MW030108;所述Spike区域的序列如SEQIDNO.1所示;所述FIPV-791146毒株的Spike片段如SEQIDNO.2所示。
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百度查询: 华中农业大学 ORF7b基因缺失的猫传染性腹膜炎减毒病毒及构建方法和应用
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