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申请/专利权人：清华大学
摘要：本发明涉及一种质粒，其包括：编码温度敏感元件的基因；位于所述编码温度敏感元件的基因下游的能够通过所述温度敏感元件调控的操纵单元；位于所述操纵单元下游的表达目标蛋白的外源基因。本发明的质粒能够通过所述温度敏感元件调控的操纵单元调控目标蛋白的表达，当温度升高到给定温度时，所述温度敏感元件失活从而操纵单元启动表达目标蛋白，当温度低于给定温度时，所述温度敏感元件抑制操纵单元启动表达目标蛋白。本发明通过所述质粒进一步提供了一种温控无细胞合成体系的构建方法，实现了在无细胞体系中通过温度调控其中目标蛋白的表达。
主权项：1.一种温控无细胞反应体系的构建方法，该方法包括下述步骤：-提供细胞提取物，所述细胞提取物是来自于大肠杆菌的细胞提取物；-使所述细胞提取物与下述质粒混合以形成温控无细胞反应体系，该质粒包括编码温度敏感元件的基因和位于所述编码温度敏感元件的基因下游的能够通过所述温度敏感元件调控的操纵单元以及位于所述操纵单元下游的表达目标蛋白的外源基因，所述温度敏感元件和所述操纵单元配合使用，所述温度敏感元件和所述操纵单元选自噬菌体λ阻遏cI-pR-pL启动子、TlpA蛋白-TlpA启动子、大肠杆菌阻遏蛋白TetR温敏变体-tet操作子、大肠杆菌阻遏蛋白LacITs-lacO位点+LacI启动子或大肠杆菌热休克蛋白-pHSP启动子中任意一种；-向所述温控无细胞反应体系中添加能量源物质和氨基酸混合液，无机盐，转录翻译辅助物质；-向所述温控无细胞反应体系中添加氧化物质和还原物质，所述氧化物质为氧化型谷胱甘肽GSSG和还原物质为还原型谷胱甘肽GSH，所述GSSG与GSH的摩尔比为2:1-4:1；-在给定温度下在反应体系中表达所述目标蛋白。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 清华大学 温控无细胞反应体系的构建方法和该方法使用的质粒以及用途
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