买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：吉林化工学院

摘要：本发明公开了一种不同蒸制次数酒黄精饮片的高效液相指纹图谱糖谱的构建方法。通过采用高效液相色谱和中药指纹图谱相似度评价系统构建不同蒸制次数酒黄精饮片的指纹图谱；确定不同蒸制次数酒黄精饮片的指纹图谱中含有8个共有特征单糖成分，分别为甘露糖（Man）、氨基葡萄糖盐酸盐（GluN）、核糖（Rib）、鼠李糖（Rha）、半乳糖醛酸（GalA）、葡萄糖（Glu）、半乳糖（Gal）、阿拉伯糖（Arab）；本发明的方法具有样品用量小、特征性强、结果可靠的特点，便于中药材炮制方向推广应用。

主权项：1.一种不同蒸制次数酒黄精饮片的高效液相指纹糖谱的构建方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：将黄精生品饮片反复蒸制三次，分别得到一蒸、二蒸、三蒸酒黄精饮片；具体的，每100kg黄精饮片加20kg黄酒，在黄酒中按酒水比1：1.875加水，使黄精能完全搅拌均匀，闷润80min，蒸制时间6h、干燥温度70℃、干燥时间13h，得一蒸酒黄精饮片，重复以上步骤得二蒸、三蒸酒黄精饮片；对生品饮片、一蒸、二蒸及三蒸饮片进行多糖的提取；具体为，取黄精饮片粉碎过60目筛；通过热水回流法按料液比1:15gml，提取温度为75℃，提取时间2h，提取两次；合并滤液浓缩，冷冻干燥，得到粗多糖粉末；纯化：棉状DEAE纤维素预处理：取棉状DEAE纤维素，用蒸馏水浸泡24h，使其充分溶胀，用布氏漏斗抽滤；再用0.5molL的NaOH溶液浸泡2-3h，抽滤，用蒸馏水反复洗涤，直至洗至pH值7左右；再用0.5molL的HCl溶液浸泡2-3h，再用蒸馏水反复洗至PH值7左右，抽干备用；取1g粗多糖配置成16.7mgml的溶液；称取定量的处理好的棉状DEAE纤维素进行超声去气泡上柱，按比例上样，黄精粗多糖：抽干的棉状DEAE＝1:70gg；用滴管围绕柱子四周缓慢上样防止糖有大幅度震荡，吸附24h；调节柱子使流速1mgmL，先用蒸馏水洗脱，至用苯酚-硫酸法检测后不显色；即可用高浓度0.5molL的NaCl洗脱，洗脱至苯酚-硫酸法检测不显色；收集洗脱液，将水洗与盐洗的洗脱液分别进行浓缩；浓缩后，水洗的洗脱液直接进行冷冻干燥；盐洗的洗脱液透析24h除色素后，再冷冻干燥，得到纯化水洗多糖、盐洗多糖粉末；样品预处理和测定：分别精密称取多糖5mg，加入2mL2molL的三氟乙酸TFA，放入水热反应器中，在110℃条件下，水解6h，在此之后，将水解液彻底蒸发，并在进一步干燥，用95％乙醇将所得粉末样品重新溶解，将粉末样品的再蒸发过程重复至少四次，以去除任何残留的TFA，溶解于60％乙腈中，离心取上清液，过0.45μm的微孔滤膜，进样检测；将纯化后的多糖样品进行HPLC测定单糖组成，建立高效液相色谱仪指纹糖谱；具体为，采用PMP柱前衍生化法测定单糖组分，色谱条件：ThermUltimate3000高效液相色谱仪HPLC与ThermoU3000二极管阵列检测器DAD联合使用，液相色谱柱为SupersilODS2柱，5μm，4.6mm×250mm，进样量：20μL；流动相：PBS，pH＝6.8，乙腈，82:18vv；流速；0.8mLmin；柱温：30℃；检测器波长245nm；运行时间为：85min，以甘露糖Man、核糖Rib、鼠李糖Rha、葡萄糖醛酸GluA、半乳糖醛酸GalA、葡萄糖Glu、半乳糖Gal，木糖Xyl，阿拉伯糖Arab，岩藻糖Fuc和氨基葡萄糖盐酸盐GluN11种单糖作为标准单糖，所述指纹糖谱共确定了8个共有峰，分别为Man、GluN、Rib、Rha、GalA、Glu、Gal、Arab。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 吉林化工学院 一种不同蒸制次数酒黄精饮片的高效液相指纹糖谱的构建方法