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申请/专利权人：南宁庞博生物工程有限公司;南宁山万生物科技有限公司

摘要：本发明公开了一种利用米曲霉生产高酶活力蛋白酶的一次补水培养方法，属于生物技术领域，该方法包括（1）备料：原料麦麸与水的比例为1：0.7～1.3ww（2）高温灭菌（3）接种：按原料计接种量为2～3%（4）初始发酵：固态发酵培养20～24小时（5）一次补水：发酵培养20～24小时开始补水，补水后培养基料水分含量为61～75%，产酶Aw水活度为0.81～0.93（6）补充空气，使氧气浓度达到19.9～20.9%VOL（7）继续发酵24～30小时（8）冷却至20℃出料。本发明方法采用的一次补水工艺，操作简单，生产效率高；通过对发酵过程中一次补水工艺前后各相关联的工艺参数进行优化与有效控制，很大地提高了所产蛋白酶的酶活力和产率，产品稳定性好，能较大地降低生产成本。

主权项：1.一种利用米曲霉生产高酶活力蛋白酶的一次补水培养方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）备料：采用麦麸作为原料，按照料水比1:0.7～1.3ww，在麦麸中加水，搅拌均匀，pH5.5～6.5；（2）高温灭菌：将配好的培养基料放入灭菌锅中进行灭菌，灭菌条件为121℃、压力0.1Mpa，时间30分钟，灭菌后将培养基料冷却至26～35℃；（3）接种：将米曲霉种子接种到已冷却好的培养基料中，进行搅拌混合，接种量为原料重量的2～3%，并装入培养托盘中和放置在培养架上；（4）初始发酵：在培养间中开始进行固态发酵培养，控制指标：第1～10小时，温度30～35℃，氧气浓度20.4～20.9%VOL，第11～24小时，温度36～41℃，氧气浓度19～20.4%VOL，培养间湿度88～96%；（5）一次补水：发酵培养20～24小时，检测培养基料水分，当培养基料水分为45～48%时，利用雾化喷头进行补水，补水操作喷淋口与物料之间的距离为20～29cm，喷淋口的角度为80～100度，喷淋水流量为6～14Lmin，补水空间循环风速2～5ms，补水后培养基料水分含量为61～75%，产酶Aw水活度为0.81～0.93；（6）补充空气：通过通风补充新鲜空气使补水后的氧气浓度为19.9～20.9%VOL，补水后培养间湿度为90～99%，开启培养间内循环风机，控制循环风速为2～5ms；将地板上的水打扫干净，防止地板潮湿而影响底层物料的生长发酵；控制好循环风速，力求每一层培养基料的温度、湿度和氧气达到均匀一致；（7）继续发酵：补水后第1～8小时，培养间内温度34～39℃，之后将温度逐步降到33～26℃直至培养结束；（8）出料：发酵培养到成熟料水分达到40～55%时冷却到20℃后出料。

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