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申请/专利权人：浙江树人学院;湖南人文科技学院;长沙曦楚信息科技有限公司

摘要：本发明公开了一种基于氮同位素GC‑IRMS分析的动物源水产品中SEM源解析方法，涉及水产品检测技术领域。本发明包括待测样品粉末和上清液的制备；向上清液中加入萃取剂萃取浓缩获得浓缩SEM；在70℃的0.1mol·L‑1氢氧化钠溶液中加入乙醛溶液并保持20min，随后将0.1mol·L‑1氢氧化钠溶液温度调整为60℃并加入溴甲烷溶液并保持30～60min进行衍生化反应；准确称取待测样品粉末以及多个分析标准品各2mg，并放入到锡囊包裹以进行稳定氮同位素分析并计算稳定氮同位素比值，随后再进行GC‑MSMS及GC‑C‑IRMS分析测定。本发明首次建立了基于氮同位素GC‑IRMS分析的动物源水产品中SEM源解析方法，该方法对开展动物源水产品中硝基呋喃类抗生素滥用监测的研究，保障水产品质量安全有重要意义。

主权项：1.一种基于氮同位素GC-IRMS分析的动物源水产品中SEM源解析方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤一、取青虾和大闸蟹样品自然解冻并于低温下粉碎，准确称取50g样品匀浆后，经干燥研磨过筛得到样品粉末，保存待EA-IRMS分析用；步骤二、准确称取50g样品匀浆后，加入萃取剂在超声环境下进行萃取，经离心处理后获取上清液，保存待GC-MSMS和GC-C-IRMS分析用；步骤三、将100ml上清液以每秒2滴的速度洗脱过氨基亲和固相萃取柱，再以20ml50％的乙腈溶液淋洗用以除去非目标含氮化合物，最后以每秒1滴的速度加入5ml1％盐酸水溶液将氨基亲和固相萃取柱上的SEM洗脱下来，获得浓缩SEM；步骤四、在70℃的0.1mol·L-1氢氧化钠溶液中加入乙醛溶液，用乙醛溶液与浓缩SEM中的氨基发生羰氨亲核反应并保持20min，随后将0.1mol·L-1氢氧化钠溶液温度调整为60℃并加入溴甲烷溶液，溴甲烷溶液与浓缩SEM中另外两个酰氨基进一步发生N-烷基化反应并保持30～60min；步骤五、准确称取待测样品粉末以及多个分析标准品各2mg，并放入到锡囊包裹以进行稳定氮同位素分析并计算稳定氮同位素比值，随后再进行GC-MSMS及GC-C-IRMS分析测定，稳定氮同位素比值的计算方式为：δ‰＝R样品R标准品-1×1000式中δ为样品的稳定氮同位素，R为15N14N；步骤六、以δ15N硝基呋喃代替δ15N外源性SEM，δ15N蛋白质代替δ15N内源性SEM，通过以下计算公式计算外源性和内源性SEM的百分比： 步骤七、按照以下公式计算外源性和内源性SEM的含量，外源性SEM含量用C外源性SEM表示，内源性SEM含量用C内源性SEM表示：C外源性SEM＝％SEM外源性×C生物体内SEM总量C内源性SEM＝％SEM内源性×C生物体内SEM总量；C生物体内SEM总量，δ15N动物体内SEM总量及δ15N蛋白质采用GC-MSMS、GC-C-IRMS和EA-IRMS分析测定；分析物的δ15N值采用内标多点校准，选用一系列已知δ15N值的IAEA标准内标物进行校准，采用热乙酰苯胺的工作标准曲线进行精密度测定；所述步骤五中的分析标准品包括呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因和甘氨酸。

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