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申请/专利权人：复旦大学附属华山医院;广东优尼德生物科技有限公司

摘要：本发明属于生物医药领域，具体涉及一种检测FGF21的发光试剂及其应用。本发明改良了发光试剂的制备方法，使用本发明所制备得到的发光试剂能准确检测FGF21蛋白，为临床检测提供了更有效的检测方法和检测产品。具体地，所述制备方法具体包括磁微球的偶联的步骤和吖啶酯抗体交联的步骤。同时，本发明提供了所述制备方法所得到的发光试剂的保存溶液，所述保存溶液有利于发光试剂的长时间稳定保存。

主权项：1.一种用于检测FGF21的发光检测试剂组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：FGF21特异性抗体包被的表面覆盖羧基的磁微粒的制备步骤，偶联了FGF21特异性抗体的吖啶酯-抗体交联物的制备步骤；所述FGF21特异性抗体包被的表面覆盖羧基的磁微粒的制备步骤包括：微球活化；微球与FGF21特异性抗体交联；微球清洗及清洗后封闭；所述微球活化的步骤如下：活化剂为EDC和sulfo-NHS，并使用0.1MMESpH5.0配制，所述EDC的使用量是每mg磁珠添加20μgEDC，所述EDC和sulfoNHS的摩尔比为1:1；所述微球与FGF21特异性抗体交联的步骤如下：将微球与FGF21特异性抗体加入到pH9.5的NaHCO3交联溶液中进行交联，所述FGF21特异性抗体浓度为0.2mgml，微球浓度为10mgml；所述微球清洗及清洗后封闭的步骤如下：使用1xTBST以2000rpmmin混合震荡清洗微球，震荡后分离去上清，共清洗5次；清洗后去上清，然后加入乙二胺和脂肪醇聚氧乙烯醚进行封闭，二者终浓度均为1%，封闭需放置于振荡器上以2000rpmmin混合震荡，在室温下进行震荡封闭2小时；所述偶联了FGF21特异性抗体的吖啶酯-抗体交联物的制备步骤包括：交联，封闭；所述交联的步骤如下：将吖啶酯和FGF21特异性抗体加入到pH9.5的NaHCO3交联溶液中进行交联，溶液中吖啶酯和FGF21特异性抗体的摩尔比为20:1；所述封闭的步骤如下：使用封闭液进行封闭，所述封闭液为9%甘氨酸、1%BSA、50mMTris、300mMNaCl，pH8.0。

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