申请/专利权人：中国农业科学院兰州兽医研究所

申请日：2023-04-26

公开（公告）日：2024-07-05

公开（公告）号：CN116536284B

主分类号：C12N9/10

分类号：C12N9/10;C12N15/70;C12N5/20;C07K16/40;C07K16/12;G01N33/569;G01N33/577;G01N33/58;G01N33/68;C12R1/19

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.07.05#授权;2023.08.22#实质审查的生效;2023.08.04#公开

摘要：本发明属于血清学检测技术领域，公开了一种MccppdhC单克隆抗体、杂交瘤细胞株及试剂盒，尤其涉及一种MccppdhC重组蛋白、特异性识别山羊支原体山羊肺炎亚种pdhC的单克隆抗体、分泌特异性识别MccppdhC单克隆抗体的杂交瘤细胞株Mccp‑H6以及利用MccppdhC重组蛋白和特异性识别MccppdhC的单克隆抗体制备的检测Mccp抗体的竞争ELISA试剂盒。本发明的MccppdhC单克隆抗体与山羊支原体山羊亚种、丝状支原体山羊亚种、绵羊肺炎支原体均不发生反应，保证反应特异性，比检测Mccp抗体的间接血凝试剂盒具有更高的特异性和敏感性，避免样本来源的种属限制。

主权项：1.一种由MccppdhC重组蛋白和特异性识别MccppdhC的单克隆抗体制备得到的检测Mccp抗体的竞争ELISA试剂盒，其特征在于，检测Mccp抗体的竞争ELISA试剂盒包括：1包被MccppdhC重组蛋白的酶标板2块，规格96孔块，4℃保存；225倍PBST浓缩液1瓶，规格60mL瓶；3标准阳性血清1管，规格0.6mL管，4℃保存；4标准阴性血清1管，规格0.6mL管，4℃保存；5兔多克隆抗体工作液1瓶，规格12mL瓶，4℃保存；6HRP标记驴抗兔二抗工作液1瓶，规格25mL瓶，4℃保存；7TMB底物显色液1瓶，规格25mL瓶，4℃保存；8终止液1瓶，规格15mL瓶，4℃保存；9封板膜2张；10说明书1份；MccppdhC重组蛋白的制备方法包括：在NCBI上获取MccppdhC基因序列，标记为S1；将MccppdhC基因序列中的TGA突变为TGG，优化密码子序列，标记为S2；合成S2基因序列，利用BamHI和XhoI限制性内切酶克隆进pET-28a质粒，阳性重组质粒转化进感受态大肠杆菌BL21，得到重组表达菌BL21-28a-pdhC；将BL21-28a-pdhC重组表达菌株在37℃，200rmin的条件下培养至OD600值为0.6～0.8，利用0.1mMIPTG诱导6h，得到可溶性表达的MccppdhC重组蛋白；利用Ni-NTAAgarose柱进行纯化，得到纯化的MccppdhC重组蛋白；S2的核苷酸序列为SEQIDNO:2；MccppdhC基因序列登录号为JMJI01000040.1，MccppdhC基因位于4889～6205bp，基因序列全长为1317bp，核苷酸序列为SEQIDNO:1；特异性识别MccppdhC的单克隆抗体制备方法包括：将特异性识别MccppdhC的杂交瘤细胞株Mccp-H6接种于BALBc雌性小鼠腹腔；获取小鼠腹水，离心，收集中间层淡黄色腹水，纯化后获得特异性识别MccppdhC的单克隆抗体；所述杂交瘤细胞株Mccp-H6保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:C202333。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国农业科学院兰州兽医研究所 Mccp pdhC单克隆抗体、杂交瘤细胞株及试剂盒

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD