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申请/专利权人：上海英基生物科技有限公司
申请日：2024-03-15
公开（公告）日：2024-07-05
公开（公告）号：CN118291444A
主分类号：C12N15/10
分类号：C12N15/10;C12Q1/6806;C40B50/06
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.07.23#实质审查的生效;2024.07.05#公开
摘要：本发明涉及文库构建技术领域，具体涉及一种smallRNA文库构建方法。该文库构建方法包括3’接头的连接、5’接头的连接，SO寡核苷酸退火，cDNA合成和文库PCR等，其中SO寡核苷酸序列长度为20～30nt，部分序列与3’接头互补，另一部分序列与5’接头互补，且部分碱基为修饰碱基，3’端具有封闭模块，可以有效封闭接头二聚体，使得接头二聚体不能被逆转录成一链cDNA，且不能被扩增成测序的文库。该方法可以有效减少接头二聚体的产生，更能实现低起始量或者miRNA含量丰度较低的样本的建库。
主权项：1.一种smallRNA文库构建方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，将smallRNA经过变性处理，打开二级结构，进行3’接头和5’接头的连接；步骤2，在第二个接头连接体系中或者两个接头连接完成后的体系中加入寡核苷酸序列并进行退火；其中，所述寡核苷酸序列长度为20～30nt，部分序列与3’接头互补，另一部分序列与5’接头互补，且部分碱基包含修饰碱基，3’端具有封闭模块；步骤3，将步骤2体系中连接上接头的smallRNA产物进行逆转录，然后将产物富集、纯化，即得构建好的文库。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 上海英基生物科技有限公司 一种small RNA文库构建方法
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