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申请/专利权人：新乡医学院

摘要：本发明公开了一种抗原结合域自动优化的嵌合抗原受体修饰细胞文库的构建、筛选方法及其应用，该方法通过在细胞中插入一段嵌合抗原受体序列，并通过顺式作用元件及反式作用因子在胞外抗原结合域不断诱导突变产生，建立一个可供后续筛选的抗体序列动态库；抗体序列动态库被受体2展示在细胞表面，形成嵌合受体库细胞文库；受体1能够识别靶标抗原上的标签，并与能够识别靶标抗原的受体2形成二聚体，从而启动筛选基因的表达，并同时启动抑制系统来维持抗原结合域的稳定。筛选嵌合抗原受体文库，将筛得的阳性细胞嵌合受体的抗原结合域进行扩增测序，即可得到抗原识别区的核酸序列。此方法可用于多种抗体制备，更为简便高效。

主权项：1.一种抗原结合域自动优化的嵌合抗原受体修饰细胞文库的构建方法，其特征在于，将包含第一基因元件、第二基因元件、第三基因元件、第四基因元件以及第五基因元件的载体转染至细胞内，所述载体为一个或多个，即得到嵌合抗原受体修饰细胞文库；所述第一基因元件为编码受体1的核苷酸序列，所述受体1包括胞外域，跨膜域及胞内域；所述胞外域可识别靶标抗原上所标记的生物素或6×His标签，所述胞内域包括烟草蚀纹病毒蛋白酶TEVP，所述受体1的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；所述第二基因元件为编码受体2的核苷酸序列，所述受体2包括胞外抗原结合域、跨膜域以及胞内信号域；所述抗原结合域为抗体序列动态库，所述动态库是在第四基因元件的作用下诱导产生一系列突变，引入序列多样性所得；所述胞内信号域包括tTA转录因子结构域以及连接序列，所述连接序列连接tTA转录因子结构域和跨膜域，包含TEVP可识别切割的序列，所述受体2是由Notch受体改造而来的synNotch受体，其核苷酸序列如SEQIDNO.2或SEQIDNO.3所示；所述第三基因元件为编码筛选基因的核苷酸序列，tTA转录因子可以启动所述筛选基因的表达；所述第四基因元件为编码顺式调控元件或反式作用因子的核苷酸序列；所述顺式调控元件能够使DNA产生DNA的单链结构；所述反式作用因子为gRNA、dCas9、感光蛋白、脱氨酶和感光蛋白与脱氨酶之间的Linker序列；所述第五基因元件为编码抑制系统的核苷酸序列，tTA转录因子可以启动所述抑制系统的表达，进而敲减或敲除反式作用因子，使抗体序列动态库维持稳定；或所述第五基因元件为编码光控制系统的核苷酸序列，所述光控制系统能够调控第四基因元件的表达：在光照条件下启动第四基因元件发挥作用，开始构建抗体动态序列库；停止光照后，第四基因元件功能被抑制，使抗体动态序列库维持稳定。

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百度查询： 新乡医学院 抗原结合域自动优化的嵌合抗原受体修饰细胞文库的构建、筛选方法及其应用