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申请/专利权人：南京工业大学
申请日：2024-04-09
公开（公告）日：2024-07-05
公开（公告）号：CN118291574A
主分类号：C12P33/20
分类号：C12P33/20;C12N9/10;C12N15/70;C12N15/54;C12N1/21;C12R1/19
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.07.23#实质审查的生效;2024.07.05#公开
摘要：本发明公开了一种糖基转移酶突变体及其催化合成人参皂苷Rh2的方法，所述突变体是在原糖基转移酶的氨基酸序列为SEQIDNO:1基础上进行的单突变或者组合突变，最终筛选出催化效果较好的GuGT14突变菌株，与SuSy形成偶联体系，实现高效催化合成人参皂苷Rh2。通过定点突变提高了糖基转移酶GuGT14的酶活，利用该突变体实现了高效催化合成Rh2，合成方法条件温和，操作简单，时间短，催化效率高，产率高，具有较好的应用前景。
主权项：1.一种利用糖基转移酶突变体催化合成人参皂苷的方法，其特征在于，包括如下步骤：1）构建含双酶共表达体系的重组菌株：将糖基转移酶GuGT14或者其突变体的基因与蔗糖合酶基因连接到重组质粒，采用热激法将连接产物转化到大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中，得到含有双酶共表达体系的重组菌株；2）重组菌的发酵诱导产酶：将重组菌株活化，转接到LB诱导培养基中，添加诱导剂IPTG诱导培养，低温离心并收集菌体，菌体重悬于适量缓冲液并破碎，离心收集上清液即为粗酶液；3）Rh2的催化合成：将PPD溶于DMSO中，加入蔗糖、粗酶液和吐温-80，反应3~100h，高温灭活，离心得上清即为Rh2。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 南京工业大学 一种糖基转移酶突变体及其催化合成人参皂苷Rh2的方法
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