申请/专利权人：上海爱萨尔生物科技有限公司

申请日：2021-03-19

公开（公告）日：2024-06-28

公开（公告）号：CN113046299B

主分类号：C12N5/071

分类号：C12N5/071

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.28#授权;2021.07.16#实质审查的生效;2021.06.29#公开

摘要：本发明的一种诱导多能干细胞定向分化制备胰岛β细胞的添加剂，所述添加剂包括JNK抑制剂、hedgehog通路拮抗剂、EGF信号因子、FGF信号因子、TGF‑β抑制剂、WNT信号通路激活剂、Notch信号通路抑制剂、小分子化合物和微量元素，所述添加剂在细胞培养的不同阶段的配比不同，各组分分阶段定向发挥作用，可以高效地诱导多能干细胞定向分化为胰岛β细胞。

主权项：1.一种诱导多能干细胞定向分化制备胰岛β细胞的添加剂，其特征在于：分为添加剂A、添加剂B、添加剂C和添加剂D，所述添加剂A用于诱导多功能细胞球分化为定型内胚层细胞阶段，所述添加剂B用于定型内胚层细胞分化为胰腺前体细胞阶段，所述添加剂C用于胰腺前体细胞分化为胰腺内分泌祖细胞阶段，所述添加剂D用于胰腺内分泌祖细胞分化为胰岛β细胞阶段；所述添加剂A为TGF-β因子、WNT信号通路激活剂和JNK信号抑制剂，其中TGF-β超家族因子为ActivinA，WNT信号通路激活剂为WNT3a，所述JNK抑制剂为CC-930，其中TGF-β因子的浓度为30-100ngmL；WNT信号通路激活剂的浓度为1-5μM；JNK信号抑制剂浓度为0.5-5μM；所述添加剂B为EGF信号因子、视黄酸、角蛋白生长因子、蛋白激酶C激活剂和Sirt1抑制剂，其中EGF信号因子为EGF，角蛋白生长因子为KGF，蛋白激酶C激活剂为TPB，Sirt1抑制剂为Nicotinamide，其中EGF信号因子的浓度为2-20ngmL；视黄酸RetinoicAcid的浓度为1-5μM；角蛋白生长因子的浓度为20-40ngmL；蛋白激酶C激活剂的浓度为100-300nM；Sirt1抑制剂的浓度为10-40μM；所述添加剂C为TGF-β抑制剂、hedgehog信号通路抑制剂、Notch信号通路抑制剂、FGF信号因子和甲状腺激素；其中TGF-β抑制剂为ALK5iII，hedgehog通路拮抗剂为环巴胺，Notch信号通路抑制剂为FLI-06，FGF信号因子为FGF10，甲状腺激素为T3，其中TGF-β抑制剂的浓度为5-20μM；hedgehog信号通路抑制剂的浓度为10-50ngmL；Notch信号通路抑制剂的浓度为0.2-1μM；FGF信号因子浓度为5-50ngml；甲状腺激素的浓度为0.1-1μM；所述添加剂D为TGF-β抑制剂、C-Met抑制剂和微量元素，其中C-Met抑制剂为BMS-777607，TGF-β抑制剂为ALK5iII，其中TGF-β抑制剂的浓度为5-20μM；C-Met抑制剂的浓度为20-100nM。

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