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申请/专利权人：深圳大学
摘要：本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种促进衣藻叶绿体基因组高效替换与同质化的技术方法，包括步骤：选取靶序列、设计TALENs识别位点，合成识别TALENs识别位点的核酸酶序列；构建TALENs表达模块载体，合成组装新合成莱茵衣藻基因组；质粒转化莱茵衣藻，筛选、功能验证转化的莱茵衣藻，实现新合成基因组替换野生型基因组和同质化。该技术方法基于莱SDRs在莱茵衣藻叶绿体基因组分布均匀的特点，通过设计合成不含TALEN识别位点且包含TALENs表达模块的新合成莱茵衣藻叶绿体基因组，转化莱茵衣藻后，新合成基因组免于被TALENs切割，而被TALENs切割成片段的野生型基因组被降解，实现了莱茵衣藻叶绿体中新合成基因组将野生型基因组序列替换。
主权项：1.一种促进衣藻叶绿体基因组高效替换与同质化的技术方法，其特征在于，包括：步骤S1、选取莱茵衣藻叶绿体基因组中短散布重复序列SDRs作为TALENs靶序列，设计TALENs识别位点；步骤S2、设计识别所述TALENs识别位点的核酸酶蛋白质序列，合成得到编码所述核酸酶的核苷酸序列；步骤S3、构建TALENs表达模块载体；步骤S4、合成组装新合成莱茵衣藻基因组，所述新合成莱茵衣藻基因组包括不含所述TALENs识别位点的莱茵衣藻叶绿体基因组、所述TALENs表达模块、抗性筛选标记和PCR水印标签；步骤S5、将所述新合成莱茵衣藻叶绿体基因组转入大肠杆菌中扩繁质粒，将所述质粒转化进入野生型莱茵衣藻叶绿体中；步骤S6、筛选、功能验证转化的莱茵衣藻细胞，实现新合成莱茵衣藻叶绿体基因组对野生型莱茵衣藻叶绿体的替换和同质化；所述TALENs靶序列为SEQIDNO.1和或SEQIDNO.2所示的核苷酸序列。
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百度查询： 深圳大学 一种促进衣藻叶绿体基因组高效替换与同质化的技术方法
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