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申请/专利权人：安徽瑞邦生物科技有限公司
申请日：2024-05-11
公开（公告）日：2024-06-28
公开（公告）号：CN118256540A
主分类号：C12N15/75
分类号：C12N15/75;C12N9/88;C12R1/125
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.06.28#公开
摘要：本发明公开一种腈水合酶转化枯草芽孢杆菌的方法，通过提高枯草芽孢杆菌感受态形成的培养基及静止温育培养的方式，使转化子数目远远高于对比例，最高达到了8.5×107cfuμg。大大提高了腈水合酶转化枯草芽孢杆菌的转化率。
主权项：1.腈水合酶转化枯草芽孢杆菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：1感受态的制备：将新鲜的枯草芽孢杆菌单菌落接种于SL培养基中，200～250rmin，35～37℃培养12～24h；再将培养物接种于新鲜的SL培养基中，200～250rmin条件下35～37℃振荡培养3～4h；所述SL培养基配比为：水解酪蛋白8～12gL，酵母粉20～30gL，葡萄糖4～6gL，氯化钠4～6gL；pH为7.0～7.5；将培养后的菌液冰浴10～20min后离心去上清，用ETM培养基重悬后离心、去上清、漂洗后加预冷的ETM培养基悬浮细胞，获得悬浮的感受态细胞；所述ETM培养基配比为：0.3～0.6molL海藻糖，0.3～0.6molL山梨醇，0.3～0.6molL甘露醇，10gL甘油；2电击转化将悬浮的感受态细胞中加入含有目标基因的穿梭载体混匀后，冰上静置3～7min，加入预冷的电转杯中冰浴8～12min，电转仪设置：1.8-2.0-kv，2mm，电击1～2次；电击完毕立即加入RM培养基，35～37℃温浴30～90min后，180～200rpm，复苏1.5～2.5h，涂板35～37℃培养20～24h；所述RM培养基的配比为：0.3～0.5molL山梨醇，0.3～0.4molL甘露醇。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 安徽瑞邦生物科技有限公司 一种腈水合酶转化枯草芽孢杆菌的方法
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