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申请/专利权人：扬州大学
摘要：本发明公开了一种降低检测限的微生物或真核生物细胞定量检测方法。所述方法以提取的样品DNA为模板，先用目标微生物或目标真核生物细胞外侧引物对样品DNA进行15个循环的PCR扩增，将PCR产物作为模板，再用目标微生物或目标真核生物细胞特异性引物进行qPCR，将获得的Ct值代入标准曲线中，计算得到样品中目标微生物或目标真核生物细胞数量。本发明通过在特异性引物外侧加设一对引物，利用PCR方法对特异性片段区域进行分子富集，再利用特异性引物进行qPCR，能够将检测下限降低到原来的1%，有效提高了检测能力。
主权项：1.降低检测限的微生物或真核生物细胞定量检测方法，其特征在于，具体步骤如下：以提取的样品DNA为模板，先用目标微生物或目标真核生物细胞外侧引物对样品DNA进行15个循环的PCR扩增，将PCR产物作为模板，再用目标微生物或目标真核生物细胞特异性引物进行qPCR，将获得的Ct值代入标准曲线中，计算得到样品中目标微生物或目标真核生物细胞数量；对于目标微生物为同一菌属的多个菌种，外侧引物源于多个菌种的特异性引物扩增区外的共有序列，外侧引物长度为18-25bp，Tm值为46-65℃，两条外侧引物的Tm值差值≤2℃，外侧引物的扩增长度≤1Kb；对于目标微生物为单个菌种或真核生物细胞，外侧引物源于特异性引物扩增区两侧，且外侧引物与特异性引物扩增区无重叠区，外侧引物长度为18-25bp，Tm值为46-65℃，两条外侧引物的Tm值差值≤2℃，外侧引物的扩增长度≤800bp。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 扬州大学 降低检测限的微生物或真核生物细胞定量检测方法
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