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申请/专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
摘要：本发明涉及一种基于自上而下策略和化学交联技术的蛋白质变体复合物解析方法，其特征在于：基于化学可断裂交联剂，通过细胞原位共价交联捕获靶蛋白及其相互作用蛋白，并利用特异性相互作用富集靶蛋白及其复合物。通过化学断裂的方式断裂交联剂，释放靶蛋白复合物，获得靶蛋白变体及其相互作用蛋白变体，进一步通过自上而下技术精确鉴定靶蛋白变体及其相互作用蛋白变体。同时，通过交联质谱技术，确定靶蛋白变体的相互作用蛋白位点和相互作用网络。本发明的优点是实验操作简单快捷，可通过原位共价交联，同时获得蛋白变体及其相互作用位点信息，为靶蛋白复合物的精确鉴定提供了重要的技术支撑。
主权项：1.基于自上而下策略和化学交联技术的蛋白质变体复合物分析方法，其特征在于，包括以下步骤：1向收集的靶标蛋白-富集标签融合蛋白高表达的细胞中加入交联剂溶液进行交联反应，2向共价交联后的细胞中加入细胞裂解液，超声破碎，离心取上清，获得含靶标蛋白及变体复合物的细胞裂解液，3向细胞裂解液中加入特异性富集材料，富集共价交联的靶标蛋白及其变体复合物。4加入亲和标签剪切蛋白酶将共价交联的靶标蛋白及其变体复合物从富集材料上酶切下来，获得共价交联的靶标蛋白及其变体复合物，5取部分共价交联的靶标蛋白及其变体复合物通过断开交联剂，还原，烷基化处理，将共价交联的靶标蛋白及其相互作用蛋白质变体释放，进一步通过自上而下质谱技术鉴定，6余下共价交联的靶标蛋白及其相互作用蛋白变体复合物直接酶解得到肽段样品；通过交联质谱技术分析靶标蛋白相互作用位点。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中国科学院大连化学物理研究所 基于自上而下策略和化学交联技术的蛋白质变体复合物分析方法
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