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申请/专利权人：淮阴师范学院

摘要：本发明公开了一种通过核磁共振氢谱定量测定左旋肉碱类保健品中有效成份的方法：采用氘代水D2O作内标，吡嗪作内标完成。选取左旋肉碱δ3.229H，s及吡嗪δ8.574H，s两处峰作定量分析。测试参数：温度298.15K，zg30脉冲，谱宽SW设为13，脉冲激发中心频率O1P为5.5，弛豫时间D1为30S，采样次数NS为32，空采次数DS为0，其他参数默认。该方法具有良好的精密度和准确度，较低的检测限及定量限，左旋肉碱有效成份含量与定量峰面积之间具有良好的线性关系。通过该方法测得四种左旋肉碱类保健品种有效成份含量均达到了官方标称值。该方法准确，方便，高效，测试成本较低，可作为定量分析左旋肉碱类保健品中有效成份的方法。

主权项：1.一种通过1HNMR定量测定左旋肉碱富马酸盐的方法，其特征在于，步骤为：第一步，氘代试剂的选择：称取20mg左旋肉碱类化合物，选择D2O作为氘代溶剂，选用topspin2.1软件自带Proton标准参数分别测定1HNMR谱，活泼氢均被氘代；第二步，定量峰及内标物的选择：采用Topspin2.1软件默认参数直接测定左旋肉碱的1HNMR谱，用D2O残余溶剂峰标定化学位移，选择吡嗪为内标，其定量峰为δ8.574H，s；第三步，测试参数优化：选择zg30脉冲采样，设定采样时间（aq）为4.15s，弛豫时间D1为30S，采样次数NS为32，空采次数DS为0，谱宽SW为13.00，中心频率o1p为6.1，其他参数默认；第四步，样品测试及数据处理：采用第三步优化后的测试参数测定样品的1HNMR谱；以吡嗪δ8.574H，s处单峰为基准，准确积分δ3.199H，s处峰面积，为减少误差，选取定量峰或内标峰的峰型轮廓线与水平基线交叉处之间作为积分区域，且内标峰与定量峰均积分5次，取其平均值作为实际积分面积；第五步：方法学验证包括线性关系验证、精密度实验、重复性实验及稳定性实验；按照样品及内标物及氘代试剂取用量，依据下式计算所取样品中左旋肉碱富马酸盐质量：式中，m左旋肉碱，m吡嗪分别表示左旋肉碱盐和吡嗪的质量，M左旋肉碱表示左旋肉碱分子量，S左旋肉碱、S吡嗪分别表示左旋肉碱和吡嗪定量峰峰面积；采购两款进口左旋肉碱富马酸盐类保健品，各取一片药片，称取质量，以研钵研成粉末，准确称取20-30mg样品，以1000µL标准溶液溶解，超声10min使有效成份充分溶解，静置3h使上层澄清，准确移取600µL上层清液转加入核磁管中，采用优化好的测试参数测定其1HNMR谱，根据峰面积通过上述公式计算溶液中左旋肉碱有效成份含量；第五步中线性关系验证测试：样品制备：准确称取280.2mg吡嗪样品，以重水溶解后转移至10mL容量瓶中，以重水定容至刻度线，摇匀备用，作为标准溶液；称取35.9mg左旋肉碱富马酸盐，装入一次性PE管中，加入1.5mL标准溶液，超声20min使样品完全溶解，得到均一、澄清、透明溶液，依次取100µL，150µL，200µL，250µL，300µL，450µL加入1.5mL一次性PE管中，以标准溶液稀释至600µL，超声10min使其完全溶解，转移至1-6号核磁管中，得到1-6号待测溶液，按照第四步方法测试并处理数据；以左旋肉碱定量峰峰面积与吡嗪定量峰面积比值为纵坐标，样品中左旋肉碱富马酸盐实际质量为横坐标作图，得工作曲线，对工作曲线进行线性拟合得回归方程，表明样品质量与峰面积之间具有良好的线性关系。

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