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一种GPC3-CAR-NKT细胞的制备方法及其应用 

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申请/专利权人:赛业(苏州)生物科技有限公司

摘要:本发明属于肿瘤免疫治疗领域,具体公开了一种GPC3‑CAR‑NKT细胞的制备方法及其应用;本发明建立了一种能高效扩增制备GPC3‑CAR‑NKT细胞的工艺,为基于NKT细胞的免疫疗法研究提供了坚实的基础,可实现临床级别的CAR‑NKT细胞制备;同时,本发明还证明了CAR工程化可以增强NKT细胞的抗肿瘤活性,证明了CAR‑NKT细胞用于肝脏实体瘤治疗的可行性,因此本发明公开的GPC3‑CAR‑NKT细胞及其制备方法可应用于针对肿瘤的免疫药物——特别是以实体肿瘤细胞为靶向细胞的药物的研发和制备。

主权项:1.一种GPC3-CAR-NKT细胞的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:1)NKT细胞的制备;2)GPC3CAR慢病毒载体构建;3)GPC3CAR慢病毒制备;4)GPC3-CAR-NKT细胞制备及表型检测;所述2)GPC3CAR慢病毒载体构建包括以下步骤:合成编码GM-CSFRα信号肽基因序列,GPC3抗体轻链可变区VL基因序列、Linker基因序列、GPC3抗体重链可变区VH基因序列、IgG4Fc基因序列、CD28跨膜区基因序列、CD28共刺激结构域基因序列以及CD3ζ胞内信号传导结构域基因序列,并将其亚克隆至LV-EF1α-MCS-kana载体,通过测序验证序列正确的克隆载体用于慢病毒包装制备;所述GM-CSFRα信号肽氨基酸序列如SEQIDNO:1所示;所述GPC3抗体轻链可变区VL氨基酸序列如SEQIDNO:3所示;所述Linker氨基酸序列如SEQIDNO:5所示;所述GPC3抗体重链可变区VH氨基酸序列如SEQIDNO:7所示;所述IgG4Fc氨基酸序列如SEQIDNO:9所示;所示CD28跨膜区氨基酸序列如SEQIDNO:11所示;所述CD28共刺激结构域氨基酸序列如SEQIDNO:13所示;所述CD3ζ胞内信号传导结构域氨基酸序列如SEQIDNO:15所示。

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