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申请/专利权人：成都生物制品研究所有限责任公司

摘要：本发明提供了一种以麻疹病毒为载体的重组新型冠状病毒疫苗的大规模生产工艺，属于病毒载体疫苗制备领域。所述方法包括以下步骤：1细胞培养：在装载有细胞微载体的生物反应器内加入无血清细胞生长液，培养Vero细胞至密度为2～5×105cellcm2；2病毒接种和培养：将重组病毒按0.001～0.1MOI接种到Vero细胞，用无血清病毒维持液培养7天，收获培养上清，得病毒收获液；3粗滤；4酶切；5超滤和洗滤6终滤。本发明的生产工艺安全、稳定、可控，批次间质量均一，利用该生产工艺制得的重组新型冠状病毒疫苗不仅效价高，而且Vero细胞DNA和Vero细胞宿主蛋白残留量低。本发明的生产工艺能够大规模生产高质量的重组新型冠状病毒疫苗，应用前景广阔。

主权项：1.一种重组新型冠状病毒疫苗的大规模生产工艺，其特征在于：包括以下步骤：（1）细胞培养：在装载有细胞微载体的生物反应器内加入无血清细胞生长液，培养Vero细胞至密度为2~5×105cellcm2；所述生物反应器为固定床式生物反应器；（2）病毒接种和培养：将重组病毒按0.001~0.1MOI接种到Vero细胞，用无血清病毒维持液培养7天，收获培养上清，得病毒收获液；其中，重组病毒是携带SARS-CoV-2病毒的S基因的麻疹病毒，S基因的序列如SEQIDNO.1所示；（3）粗滤：将病毒收获液用深层滤器过滤，收集滤过液；所述深层滤器的孔径为2.5~3.5μm；（4）酶切：在滤过液中加入核酸酶进行酶切，得到酶切后的病毒收获液；所述核酸酶的终浓度为15~25Uml；（5）超滤和洗滤：将酶切后的病毒收获液进行超滤和洗滤，得到浓缩后的病毒收获液；所述超滤时采用的超滤膜包分子量为250~350kD，浓缩倍数为3~10倍，液体流速为3~10Lh，进液端压力为≤0.1Bar，回流端压力≤0.1Bar，跨膜压差≤0.1Bar，温度为室温；洗滤时采用的清洗液体为5%蔗糖溶液，浓缩倍数为10~20倍，液体流速为3~10Lh，进液端压力≤0.1Bar，回流端压力≤0.1Bar，跨膜压差≤0.1Bar，温度为室温；（6）终滤：将浓缩后的病毒收获液用深层滤器过滤，收集滤过液；所述深层滤器的孔径为1.0~1.5μm。

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