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申请/专利权人：陕西中医药大学
摘要：本发明涉及植物基因工程技术领域，具体公开了一种秦艽VIGS沉默体系的建立方法和应用，首先获得pTRV2:EGFP‑GmPDS重组质粒，农杆菌转化秦艽组织，可通过绿色荧光蛋白观察转化效果。本发明成功在秦艽中建立了VIGS沉默体系，使得秦艽中GmPDS基因表达水平降低，类胡萝卜素含量降低，而作为秦艽中主要药效成分的马钱苷酸和龙胆苦苷的含量提高。本发明操作方法简单、快速，避免了稳定遗传转化的繁杂过程，有效解决了验证秦艽基因功能的问题，为挖掘、验证秦艽重要性状的基因、抗病基因以及生源合成相关酶基因的功能提供技术依据。
主权项：1.一种秦艽VIGS沉默体系的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：pMD19-T-GmPDS构建：以秦艽DNA为模板，以GmPDS-F和GmPDS-R为引物扩增获得GmPDS基因的CDS全长序列，然后与pMD19-T载体连接，获得质粒pMD19-T-GmPDS；pTRV2:EGFP-GmPDS重组质粒构建：以质粒pMD19-T-GmPDS为模板，以GmPDS-pTRV2-F和GmPDS-pTRV2-R为引物扩增获得GmPDS基因片段，然后与线性化的pTRV2:EGFP载体连接，获得pTRV2:EGFP-GmPDS重组质粒；所述pTRV2:EGFP载体是在pTRV2载体的1053bp位置插入绿色荧光蛋白EGFP所得；农杆菌注射法转化秦艽叶片：将pTRV2:EGFP-GmPDS重组质粒转入GV3101农杆菌感受态，培养后获得菌液，注射法转化秦艽组织。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 陕西中医药大学 一种秦艽VIGS沉默体系的建立方法和应用
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