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一种小菜蛾蛋白Western Blot定量检测方法 

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申请/专利权人:赣南师范大学

摘要:本发明提供了一种小菜蛾蛋白WesternBlot定量检测方法,属于WesternBlot蛋白定量技术领域。本发明的小菜蛾蛋白WesternBlot定量检测方法,包括如下步骤:苯酚SDS提取法提取小菜蛾总蛋白,以α‑Tubulin为内参进行WesternBlot分析。本发明通过研究不同蛋白提取方法提取小菜蛾蛋白质的效果,以及选取合适的内参,建立了一套稳定用于蛋白定量的WB体系,该体系不仅能够较好地应用于小菜蛾不同发育阶段和不同组织样品,而且能够较好地应用于开展小菜蛾取食不同寄主植物和小菜蛾与寄主植物互作等研究。

主权项:1.一种小菜蛾蛋白WesternBlot定量检测方法,其特征在于,包括如下步骤:采用苯酚SDS提取法提取小菜蛾总蛋白,以α-Tubulin为内参进行WesternBlot分析;所述苯酚SDS提取法包括如下步骤:将小菜蛾研磨成粉,与苯酚、denseSDS缓冲液混匀,离心取上清;得到的上清液与甲醇混匀、冷冻后离心,弃上清;所得沉淀用冷甲酮清洗,晾干后,加入1%SDS溶液溶解蛋白,离心得到的上清液为小菜蛾蛋白提取物;所述WesternBlot分析包括如下步骤:NC膜转膜封闭后洗涤,先与稀释后的抗α-Tubulin抗体进行反应1,再与稀释后的二抗进行反应2,加入显影液显色。

全文数据:

权利要求:

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