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申请/专利权人：广州普世利华科技有限公司

摘要：本发明公开一种快速检测猪伪狂犬病毒Pseudorabiesvirus,PRV、猪圆环病毒Porcinecircovirus,PCV、猪细小病毒Porcineparvovirus，PPV的RDA方法及试剂盒，包括特异性引物组以及RDA荧光标记探针，以实现对猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒、猪细小病毒的安全、特异、灵敏、简便的检测，从而弥补现有传统检测技术的不足。本发明中提供的试剂盒可省去核酸提取步骤，在恒温条件下20min内实现对三种病毒的检测，特异性为100％，与普通PCR方法相比，RDA荧光法在恒温下反应，不需变温，不需复杂仪器，而且反应时间短，适用于现场快速检测。本发明的方法及其试剂盒具有操作简单、快速、特异性好、灵敏度高、成本低廉等特点，可为猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒、猪细小病毒现场快速检测筛查提供有效的技术手段，具有广阔的应用前景。

主权项：1.一种多重检测猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒和猪细小病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括核酸提取试剂、恒温扩增反应模块、阳性对照、阴性对照、探针及引物对；所述探针核苷酸序列如SEQIDNO.1-6所示，其中核苷酸序列为SEQIDNO.1或SEQIDNO.4的探针用于检测猪伪狂犬病毒PRV，核苷酸序列为SEQIDNO.2或SEQIDNO.5的探针用于检测猪圆环病毒PCV，核苷酸序列为SEQIDNO.3或SEQIDNO.6的探针用于检测猪细小病毒PPV；所述核苷酸序列为SEQIDNO.1-3所示的探针，其5’端标记发光基团，3’端标记淬灭基团，第5-10位碱基中任一位置用四氢呋喃残基THF替代；所述的SEQIDNO.4探针5’端起第33位碱基T标记FAM发光基团，第34位碱基用四氢呋喃残基THF替代，第35位碱基标记BHQ1淬灭基团，3’端进行C3-spacer阻断修饰；所述的SEQIDNO.5探针5’端起第33位碱基T标记CY5发光基团，第34位碱基用四氢呋喃残基THF替代，第35位碱基标记BHQ2淬灭基团，3’端进行C3-spacer阻断修饰；所述的SEQIDNO.6探针5’端起第30位碱基T标记ROX发光基团，第32位碱基用四氢呋喃残基THF替代，第34位碱基标记BHQ2淬灭基团，3’端进行C3-spacer阻断修饰；所述引物对核苷酸序列如SEQIDNO.7和SEQIDNO.8、SEQIDNO.9和SEQIDNO.10、SEQIDNO.11和SEQIDNO.12所示，靶标序列如SEQIDNO.13、SEQIDNO.14、SEQIDNO.15所示；所述的恒温扩增反应模块为RDA恒温扩增反应混合试剂的冻干粉试剂；所述RDA恒温扩增反应混合试剂的冻干粉试剂包括氨基酸序列如SEQIDNO.17所示的重组酶KX和氨基酸序列如SEQIDNO.19所示的KY蛋白。

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