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申请/专利权人：中国生物技术股份有限公司;武汉生物制品研究所有限责任公司
摘要：本发明提供一种唾液酸转移酶基因缺失的MDCK细胞株及其构建方法和应用。与原始MDCK细胞以及构建的MDCK‑st3gal2KO细胞相比，本发明采用CRISPR‑Cas9基因编辑方法构建的MDCK‑st3gal1KO细胞和MDCK‑st3galKO细胞能够提升对人流感病毒的敏感性。
主权项：1.一种唾液酸转移酶基因st3gal1和st3gal2均缺失的MDCK细胞株的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：获取唾液酸转移酶基因st3gal1缺失的MDCK细胞株，采用基于CRISPRCas9基因编辑系统来敲除MDCK细胞中的唾液酸转移酶基因st3gal1，所针对靶点序列为：GCCCGTACCAGGACTCTCGG；进一步采用CRISPRCas9基因编辑系统敲除MDCK细胞中的唾液酸转移酶基因st3gal2；其中，CRISPRCas9基因编辑系统所采用的gRNA载体质粒为带有gRNA骨架、Cas9表达序列、NLS核定位序列以及抗氨苄基因的pX330，同源臂载体质粒选择带有多个临近的常用酶切位点、Loxp片段以及嘌呤霉素抗性基因的pY75；针对性敲除基因st3gal1的gRNA序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示，5’同源臂序列如SEQIDNO.5所示，3’同源臂序列如SEQIDNO.6所示，针对性敲除基因st3gal2的gRNA序列如SEQIDNO.7和SEQIDNO.8所示；5’同源臂序列如SEQIDNO.11所示；3’同源臂序列如SEQIDNO.12所示。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中国生物技术股份有限公司 武汉生物制品研究所有限责任公司 唾液酸转移酶基因缺失的MDCK细胞株及构建方法和应用
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