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利用基因编辑敲除TaSK2A在增加小麦籽粒长度中的应用 

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申请/专利权人:山东大学

摘要:本发明公开了一种利用基因编辑敲除TaSK2A在增加小麦籽粒长度中的应用,是通过设计靶向TaSK2A基因的单链引导RNA,构建敲除小麦体内TaSK2A基因的植物双元表达载体pBUE411‑TaSK2A;将该植物双元表达载体通过农杆菌转化到普通小麦中,获得TaSK2A基因敲除的转基因小麦,实现小麦种子籽粒长度的增加。实验证实TaSK2A基因敲除的转基因小麦实现了小麦种子籽粒长度的增加和千粒重的提高。本发明的应用为利用基因工程技术实现小麦快速育种、提高小麦产量,提供了一种切实可行的方法,具有重要的育种应用价值和广阔市场应用前景。

主权项:1.一种利用基因编辑敲除TaSK2A增加小麦籽粒长度的方法,其特征在于:所述方法的步骤是:设计靶向TaSK2A基因的sgRNA,构建含有该sgRNA的敲除小麦体内TaSK2A基因的双元表达载体pBUE411-TaSK2A;将该双元表达载体通过农杆菌转化到普通小麦中,获得TaSK2A基因敲除的转基因小麦,得到籽粒长度增加的小麦突变体;其中,所述靶向TaSK2A基因的sgRNA的核苷酸序列为GGAGATGATGTGACCGGTCA;所述双元表达载体pBUE411-TaSK2A包含表达盒E1和表达盒E2,其核苷酸序列如SEQIDNO.4所示;其中表达盒E1的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示,其从上游至下游依次是:来自小麦的TaU3启动子,靶向TaSK2A基因的sgRNA,终止子T1;表达盒E2的核苷酸序列如SEQIDNO.6所示,其从上游至下游依次是:来自玉米的泛素启动子Ubi,Cas9编码序列,终止子T2;其中,所述来自小麦的TaU3启动子的核苷酸序列如SEQIDNO.7所示;所述靶向TaSK2A基因的sgRNA的核苷酸序列为GGAGATGATGTGACCGGTCA;所述终止子T1的核苷酸序列如SEQIDNO.8所示;所述来自玉米的泛素启动子Ubi的核苷酸序列如SEQIDNO.9所示;所述Cas9编码序列的核苷酸序列如SEQIDNO.10所示;所述终止子T2的核苷酸序列如SEQIDNO.11所示。

全文数据:

权利要求:

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