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申请/专利权人：福建农林大学
摘要：本发明公开了一种通过短寡核苷酸构建含标签序列载体文库的方法及应用。该方法需两种寡核苷酸，即定制的标签引物和可用于所有文库构建的通用引物。标签引物的中间是标签信序列，两侧是退火序列。通用引物的两侧是与标签引物退火序列互补的序列，中间为可被寄主微生物识别为碱基损伤的修饰碱基。将标签引物文库与等量的通用引物通过退火，获取引物二聚体。引物二聚体两侧为碱基配对的DNA双链，且为粘性末端。引物二聚体的中间为不配对的Ω环结构，Ω环的双链分别含有标签引物所携带的标签信息和通用引物携带的修饰碱基。引物二聚体与线性化载体连接，再转化大肠杆菌，通过细胞内源的碱基切除修复机制将Ω环的修饰碱基所在区域替换为标签序列。
主权项：1.一种通过短寡核苷酸构建含标签序列载体文库的方法，其特征在于，包括：1预备可用于所有文库构建的通用引物；2定制中间含预设标签序列的标签引物；其中，标签引物为长度60nt以下的单链寡核苷酸，其中间是欲引入载体的标签序列，其两侧是退火序列；通用引物为单链寡核苷酸，其中间为一个多个尿嘧啶或其他可被寄主微生物识别为碱基损伤的修饰碱基，其两侧为标签引物退火序列的同源序列；标签引物及通用引物的两侧序列能互补配对；3将标签引物与等量的通用引物通过同源序列间的退火，获取引物二聚体；所述引物二聚体的两侧为碱基配对的DNA双链，且引物二聚体两端为粘性末端；引物二聚体的中间为不配对的环状结构，环状结构的双链分别含有标签引物所携带的标签序列和通用引物携带的修饰碱基；4制备两粘性末端与引物二聚体粘性末端相兼容的线性化载体；5将引物二聚体和线性化载体骨架通过T4DNA连接酶连接成重组分子；6转化大肠杆菌；7挑选单克隆，摇菌提质粒，测序验证。
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百度查询： 福建农林大学 一种通过短寡核苷酸构建含标签序列载体文库的方法及应用
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