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申请/专利权人：天津微纳芯科技有限公司;微纳芯(苏州)科技有限公司
摘要：本发明涉及核酸体外扩增检测的技术领域，具体提供了一种检测靶序列数多于荧光通道数的实时荧光PCR检测方法，该检测方法利用非特异性荧光染料和特异性探针在不同温度下发出荧光信号不一样的原理，实现了能够利用较少的荧光通道数检测更多的靶点，有助于解决实时荧光PCR检测通量低、检测成本高和检测时间长的问题。
主权项：1.一种检测靶序列数多于荧光通道数的实时荧光PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1当荧光通道数为m，检测n个靶序列，且nm时，根据n个靶序列分别设计n对特异性引物和m个荧光探针；其中，m为≥1的正整数，n为≥2的正整数；2配制PCR体系，所述PCR体系包括n对特异性引物、m个荧光探针和n-m个荧光染料；m个靶序列分别采用第一、第二、......第m荧光探针检测，n-m个靶序列分别采用第一、第二、......第n-m荧光染料检测；其中，检测荧光染料的荧光通道与至少一种检测荧光探针的荧光通道相同；3设定PCR程序，设定预变性的第一温度和第一时间，变性的第二温度和第二时间，退火延伸的第三温度和第三时间，循环次数：其中，在PCR扩增的整个循环过程中，在第二温度时采集荧光探针的荧光信号，以及在第三温度时采集荧光探针和荧光染料的总荧光信号，分别记录荧光信号强度；4依据步骤3记录的荧光信号强度，计算n-m个靶序列的荧光信号强度差异值；若差异值大于阈值，则判定n-m个靶序列有扩增产物；若差异值小于阈值，则判定n-m个靶序列没有扩增产物。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 天津微纳芯科技有限公司 微纳芯(苏州)科技有限公司 检测靶序列数多于荧光通道数的实时荧光PCR检测方法及其应用
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