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申请/专利权人:杭州力文所生物科技有限公司
摘要:本发明公开了一种双功能融合蛋白PETase‑MHETase变体,其技术方案要点是包括以野生型MHETase和PETase作为母本(氨基酸序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示),分别进行多种方式的点突变,得到多种PETase变体和MHETase变体。然后用柔性甘氨酸‑丝氨酸接头共价连接MHETase变体的C端和PETase变体的N端,得到多种PETase‑MHETase变体。得到的多种PETase‑MHETase变体均能在72℃环境下催化6h就能将80%以上的PET粉末降解为对苯二甲酸和乙二醇。
主权项:1.一种双功能融合蛋白PETase-MHETase变体,其特征在于:所述PETase-MHETase变体由柔性接头共价连接MHETase变体的C端和PETase变体的N端形成,其中所述MHETase变体包括:a)MHETase变体一:由氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的野生型MHETase进行以下点突变获得:Y27QK-M112FY-W340L;或b)MHETase变体二:在所述MHETase变体一的基础上进行以下点突变中的至少一个:E30A、S51G、G84S、D95A、Y117L、V332G、D343V、K362S、I367T、L370A、Q476R、F487A,MHETase变体二与野生型MHETase的氨基酸序列同源性达到95%以上;所述PETase变体包括:a)PETase变体一:由氨基酸序列如SEQIDNO.2所示的野生型PETase进行以下点突变获得:V40LF-R159P-S200F-A234L;或b)PETase变体二:在所述PETase变体一的基础上进行以下点突变中的至少一个:A9R、A51S、Q89L、M90S、S176H、L178R、D182N、N187A、Q190A、K215Y、M224V、E236G,PETase变体二与野生型PETase的氨基酸序列同源性达到95%以上;所述PETase-MHETase变体在72℃环境下催化6h就能将80%以上的PET粉末降解为对苯二甲酸和乙二醇。
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