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申请/专利权人：云南农业大学

摘要：本发明公开了一种川东龙胆的组培快繁方法，包括以下步骤：S1、取根块；S2、对根块进行清洗和消毒杀菌；S3、将根块移植进入到初代培养基；S4、选取不定芽长度为3‑6cm的植株，将植株取出并对根块进行分切，使得每块新切的根块上都带有2‑3个不定芽；S5、将新切的每个根块移植到增殖培养基中进行培养；S6、对同一根块上不定芽的芽长超过5cm的数量为7‑9个的植株进行两步分切，第一步对芽长超过5cm的分枝进行截断，第二步对根块进行分切；S7、将植株取出，选取茎粗达到1.5‑2.0mm的芽连带基部根茎组织进行单个分离，将分离的植物植入到生根培养基中进行培养；S8、生根培养25‑35天后，将生根植株整体取出并移植到炼苗袋中炼苗，炼苗完成后移栽到栽培容器中。

主权项：1.一种川东龙胆的组培快繁方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、取无病害的川东龙胆根茎交界处的根块；S2、对根块进行清洗和消毒杀菌：将根块表面清洗干净，清洗完成后，使用0.5％的高锰酸钾溶液杀菌3分钟，用自来水冲洗3次后，用75％乙醇浸泡30秒，再用0.1％HgCl2溶液浸泡18-20分钟，浸泡完成后用无菌水清洗3-4次去除残留的HgCl2；S3、将清洗和消毒杀菌完成后的根块移植进入到以MS为基本培养基的初代培养基中进行培养，其中初代培养基中的琼脂含量为6-6.5gL，蔗糖含量为25-35gL；S4、S3中的根块在初代培养基培养35-40天后，长出若干不定芽，选取不定芽长度为3-6cm的植株，将植株取出并对根块进行分切，并使得每块新切的根块上都带有2-3个不定芽；S5、将新切的每个根块移植到以MS为基本培养基的增殖培养基中进行培养，其中增殖培养基中的琼脂含量为6-6.5gL，蔗糖含量为25-35gL，NAA含量为0.08-0.12mgL，6-BA含量为0.4-0.6mgL；S6、对S5中同一根块上不定芽的芽长超过5cm的数量为7-9个的植株进行两步分切，第一步对芽长超过5cm的分枝进行截断，截断后留下茎段的长度为1cm，第二步对根块进行分切，并使得每个分切的根块上的不定芽数量为2-3个；S7、待增殖培养基中植物的数量达到设定值后，将植物取出，选取茎粗达到1.5-2.0mm的芽连带基部根茎组织进行单个分离，其余的继续培养，将分离的植物植入到以MS为基本培养基的生根培养基中进行培养，其中生根培养基中的琼脂含量为5-6gL，蔗糖含量为25-35gL，活性炭含量为0.08-0.12gL，NAA含量为0.02-0.08mgL；S8、生根培养25-35天后，将植物整体取出并移植到口径为5cm的炼苗袋中炼苗，炼苗完成后移栽到栽培容器中。

全文数据：一种川东龙胆的组培快繁方法技术领域本发明涉及植物培养技术领域，特别涉及一种川东龙胆的组培快繁方法。背景技术川东龙胆系龙胆科龙胆属多年生草本，高10-15厘米；根多数略肉质，须状；花枝多数丛生，为黄绿色。花单生枝顶，无花梗。目前，川东龙胆种子播种繁殖比较困难，曾经也有人做过龙胆分株和扦插试验；但扦插尚未成功，分株繁殖系数低，实际意义不大，这样就使得川东龙胆的繁育难度问题依然没有解决。发明内容本发明的目的是提供一种川东龙胆的组培快繁方法，旨在解决川东龙胆繁育难的问题。本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种川东龙胆的组培快繁方法，包括以下步骤：S1、取无病害的川东龙胆根茎交界处的根块；S2、对根块进行清洗和消毒杀菌；S3、将清洗和消毒杀菌完成后的根块移植进入到以MS为基本培养基的初代培养基中进行培养，其中初代培养基中的琼脂含量为6-6.5gL，蔗糖含量为25-35gL；S4、S3中的根块在初代培养基培养35-40天后，长出若干不定芽，选取不定芽长度为3-6cm的植株，将植株取出并对根块进行分切，并使得每块新切的根块上都带有2-3个不定芽；S5、将新切的每个根块移植到以MS为基本培养基的增殖培养基中进行培养，其中增殖培养基中的琼脂含量为6-6.5gL，蔗糖含量为25-35gL，NAA含量为0.08-0.12mgL，6-BA含量为0.4-0.6mgL；S6、对S5中同一根块上不定芽的芽长超过5cm的数量为7-9个的植株进行两步分切，第一步对芽长超过5cm的分枝进行截断，截断后留下茎段的长度为1cm，第二步对根块进行分切，并使得每个分切的根块上的不定芽数量为2-3个；S7、待增殖培养基中植物的数量达到设定值后，将植物取出，选取茎粗达到1.5-2.0mm的芽连带基部根茎组织进行单个分离，其余的继续培养，将分离的植物植入到以MS为基本培养基的生根培养基中进行培养，其中生根培养基中的琼脂含量为5-6gL，蔗糖含量为25-35gL，活性炭含量为0.08-0.12gL，NAA含量为0.02-0.08mgL；S8、生根培养25-35天后，将植物整体取出并移植到口径为5cm的炼苗袋中炼苗，炼苗完成后移栽到栽培容器中。本发明的进一步设置为：所述S2中对根块的清洗和消毒杀菌包括：将根块表面清洗干净，清洗完成后，使用0.5％的高锰酸钾溶液杀菌3分钟，用自来水冲洗3次后，用75％乙醇浸泡30秒，再用0.1％HgCl2溶液浸泡18-20分钟，浸泡完成后用无菌水清洗3-4次去除残留的HgCl2。本发明的进一步设置为：所述S3中初代培养基中的琼脂含量为6.25gL，蔗糖含量为30gL。本发明的进一步设置为：所述S5中增殖培养基中的琼脂含量为6.25gL，蔗糖含量为30gL，NAA含量为0.10mgL，6-BA含量为0.50mgL。本发明的进一步设置为：所述S7中生根培养基中的琼脂含量为5gL，蔗糖含量为30gL，活性炭含量为0.10gL，NAA含量为0.05mgL。本发明的进一步设置为：所述S3、S5和S7培养时，培养植株的培养瓶上均覆盖有覆盖膜，S8中在进行炼苗之前，先将培养瓶移动到炼苗的环境中，将覆盖膜揭开，放置2-3天后再移植到炼苗袋中。本发明的进一步设置为：所述初代培养基、增殖培养基和生根培养基的pH均为5.8。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：取用根茎交接处的根块，由于此处的根组织会留有茎的部分组织，因此在通过初代培养基进行培养的时候，由于初代培养基中各主要成分利于不定芽分化生长，因此可以较好的生长出新芽；待初代培养基中植株芽长度在3-6cm之间时，将植株整体移出，此时每个根块上的不定芽数量大概是5-8个，将根块切成若干块，每块新切的根块上带有2-3个不定芽，即一个根块大概分切成2-4个，此时再将新切的根块移植到增殖培养基中，同时对长度超过5cm的芽在基部靠近根块的一端切断，留下1cm长的芽，这样就能够去除过长不定芽的顶端优势，便于新的不定芽的产生；同时由于增值培养基中的各个组分利于新长出的不定芽的生长，所以新分切的根块上的不定芽能够快速且健康的长出；当同一根块上不定芽的数量在7-9个后，再进行分切，每个根块分切成带有2-3个茎段的状态，此时一个根块可以分切为3-4个，如此周而复始，可以大大的提高根块以及不定芽的数量；当不定芽的数量达到生产设定的数量后，将根块取出并将叶色深绿茎粗达到1.5-2.0mm的芽连带基部根茎组织进行单个分离其余的继续进行殖培养，将单个分离的单芽带着根块一起移栽到生根培养基中进行生根培养；生根培养的过程中，活性炭不仅可以为植物的生根提供一个黑暗的环境，便于根系生长，同时还吸收不利于根系生长的醌类等有毒物质，从而加速了根部的生长速度，提高了长出根系的质量；同时植物在移栽到栽培容器中之前进行了炼苗，如此可以提高植物移栽后的存活率。具体实施方式以下结合具体实施例对本发明提出的一种川东龙胆的组培快繁方法作进一步详细说明。根据下面说明和权利要求书，本发明的优点和特征将更清楚。实施例1一种川东龙胆的组培快繁方法，包括以下步骤：S1、取无病害的川东龙胆根茎交界处的根块；S2、对根块进行清洗和消毒杀菌；S3、将清洗和消毒杀菌完成后的根块移植进入到以MS为基本培养基的初代培养基中进行培养，其中初代培养基中的琼脂含量为6gL，蔗糖含量为35gL；S4、S3中的根块在初代培养基培养35天后，长出若干不定芽，选取不定芽长度为3-6cm的植株，将植株取出并对根块进行分切，并使得每块新切的根块上都带有2-3个不定芽；S5、将新切的每个根块移植到以MS为基本培养基的增殖培养基中进行培养，其中增殖培养基中的琼脂含量为6.5gL，蔗糖含量为25gL，NAA含量为0.12mgL，6-BA含量为0.4mgL；S6、对S5中同一根块上不定芽的芽长超过5cm的数量为7-9个的植株进行两步分切，第一步对芽长超过5cm的部分分枝进行截断，截断后留下茎段的长度为1cm，第二步对根块进行分切，并使得每个分切的根块上的不定芽数量为2-3个；S7、待增殖培养基中植物的数量达到设定值后，将植物取出，选取叶色深绿且茎粗达到1.5-2.0mm的芽连带基部根茎组织进行单个分离，其余的继续培养，将分离的植物植入到以MS为基本培养基的生根培养基中进行培养，其中生根培养基中的琼脂含量为6gL，蔗糖含量为25gL，活性炭含量为0.12gL，NAA含量为0.02mgL；S8、生根培养35天后，将植物整体取出并移栽到口径为5cm的炼苗袋中炼苗30天，炼苗完成后移栽到栽培容器中。所述S2中对根块的清洗和消毒杀菌包括：将根块表面清洗干净，清洗完成后，使用0.5％的高锰酸钾溶液杀菌3分钟，用自来水冲洗3次后，用75％乙醇浸泡30秒，再用0.1％HgCl2溶液浸泡18分钟，浸泡完成后用无菌水清洗3-4次去除残留的HgCl2。所述初代培养基、增殖培养基和生根培养基的pH均为5.8。实施例2一种川东龙胆的组培快繁方法，包括以下步骤：S1、取无病害的川东龙胆根茎交界处的根块；S2、对根块进行清洗和消毒杀菌；S3、将清洗和消毒杀菌完成后的根块移植进入到以MS为基本培养基的初代培养基中进行培养，其中初代培养基中的琼脂含量为6.5gL，蔗糖含量为25gL；S4、S3中的根块在初代培养基培养40天后，长出若干不定芽，选取不定芽长度为3-6cm的植株，将植株取出并对根块进行分切，并使得每块新切的根块上都带有2-3个不定芽；S5、将新切的每个根块移植到以MS为基本培养基的增殖培养基中进行培养，其中增殖培养基中的琼脂含量为6gL，蔗糖含量为35gL，NAA含量为0.08mgL，6-BA含量为0.6mgL；S6、对S5中同一根块上不定芽的芽长超过5cm的数量为7-9个的植株进行两步分切，第一步对芽长超过5cm的部分分枝进行截断，截断后留下茎段的长度为1cm，第二步对根块进行分切，并使得每个分切的根块上的不定芽数量为2-3个；S7、待增殖培养基中植物的数量达到设定值后，将植物取出，选取叶色深绿且茎粗达到1.5-2.0mm的芽连带基部根茎组织进行单个分离，其余的继续培养，将分离的植物植入到以MS为基本培养基的生根培养基中进行培养，其中生根培养基中的琼脂含量为6.5gL，蔗糖含量为35gL，活性炭含量为0.08gL，NAA含量为0.08mgL；S8、生根培养25天后，将植物整体取出并移栽到口径为5cm的炼苗袋中炼苗30天，炼苗完成后移栽到栽培容器中。所述S2中对根块的清洗和消毒杀菌包括：将根块表面清洗干净，清洗完成后，使用0.5％的高锰酸钾溶液杀菌3分钟，用自来水冲洗3次后，用75％乙醇浸泡30秒，再用0.1％HgCl2溶液浸泡20分钟，浸泡完成后用无菌水清洗3-4次去除残留的HgCl2。所述S3、S5和S7培养时，培养植株的培养瓶上均覆盖有覆盖膜，S8中在进行炼苗之前，先将培养瓶移动到炼苗的环境中，将覆盖膜揭开，放置2天后再移栽到炼苗袋中进行炼苗。所述初代培养基、增殖培养基和生根培养基的pH均为5.8。实施例3一种川东龙胆的组培快繁方法，包括以下步骤：S1、取无病害的川东龙胆根茎交界处的根块；S2、对根块进行清洗和消毒杀菌；S3、将清洗和消毒杀菌完成后的根块移植进入到以MS为基本培养基的初代培养基中进行培养，其中初代培养基中的琼脂含量为6.25gL，蔗糖含量为30gL；S4、S3中的根块在初代培养基培养38天后，长出若干不定芽，选取不定芽长度为3-6cm的植株，将植株取出并对根块进行分切，并使得每块新切的根块上都带有2-3个不定芽；S5、将新切的每个根块移植到以MS为基本培养基的增殖培养基中进行培养，其中增殖培养基中的琼脂含量为6.25gL，蔗糖含量为30gL，NAA含量为0.10mgL，6-BA含量为0.5mgL；S6、对S5中同一根块上不定芽的芽长超过5cm的数量为7-9个的植株进行两步分切，第一步对芽长超过5cm的分枝进行截断，截断后留下茎段的长度为1cm，第二步对根块进行分切，并使得每个分切的根块上的不定芽数量为2-3个；S7、待增殖培养基中植物的数量达到设定值后，将植物取出，选取叶色深绿且茎粗达到1.5-2.0mm的芽连带基部根茎组织进行单个分离，其余的继续培养，将分离的植物植入到以MS为基本培养基的生根培养基中进行培养，其中生根培养基中的琼脂含量为6.25gL，蔗糖含量为30gL，活性炭含量为0.10gL，NAA含量为0.05mgL；S8、生根培养25天后，将植物整体取出并移栽到口径为5cm的炼苗袋中炼苗30天，炼苗完成后移栽到栽培容器中。所述S2中对根块的清洗和消毒杀菌包括：将根块表面清洗干净，清洗完成后，使用0.5％的高锰酸钾溶液杀菌3分钟，用自来水冲洗3次后，用75％乙醇浸泡30秒，再用0.1％HgCl2溶液浸泡19分钟，浸泡完成后用无菌水清洗3-4次去除残留的HgCl2。所述S3、S5和S7培养时，培养植株的培养瓶上均覆盖有覆盖膜，S8中在进行炼苗之前，先将培养瓶移动到炼苗的环境中，将覆盖膜揭开，放置3天后再移栽到炼苗袋中进行炼苗。所述初代培养基、增殖培养基和生根培养基的pH均为5.8。实施例4一种川东龙胆的组培快繁方法，包括以下步骤：S1、取无病害的川东龙胆根茎交界处的根块；S2、对根块进行清洗和消毒杀菌；S3、将清洗和消毒杀菌完成后的根块移植进入到以MS为基本培养基的初代培养基中进行培养，其中初代培养基中的琼脂含量为6.25gL，蔗糖含量为28gL；S4、S3中的根块在初代培养基培养36天后，长出若干不定芽，选取不定芽长度为3-6cm的植株，将植株取出并将不定芽从根块上切下；S5、将新切的每个不定芽移植到以MS为基本培养基的增殖培养基中进行培养，其中增殖培养基中的琼脂含量为6.3gL，蔗糖含量为30gL，NAA含量为0.10mgL，6-BA含量为0.4mgL，培养时间为30天；所述S2中对根块的清洗和消毒杀菌包括：将根块表面清洗干净，清洗完成后，使用0.5％的高锰酸钾溶液杀菌3分钟，用自来水冲洗3次后，用75％乙醇浸泡30秒，再用0.1％HgCl2溶液浸泡19分钟，浸泡完成后用无菌水清洗3-4次去除残留的HgCl2。所述初代培养基的pH为5.8。实施例5一种川东龙胆的组培快繁方法，包括以下步骤：S1、取无病害的川东龙胆的茎段；S2、对茎段进行清洗和消毒杀菌；S3、将清洗和消毒杀菌完成后的茎段移植进入到以MS为基本培养基的初代培养基中进行培养，其中初代培养基中的琼脂含量为6.2gL，蔗糖含量为35gL；S4、初代培养基培养30天。所述S2中对茎段的清洗和消毒杀菌包括：将茎段表面清洗干净，清洗完成后，使用0.5％的高锰酸钾溶液杀菌3分钟，用自来水冲洗3次后，用75％乙醇浸泡30秒，再用0.1％HgCl2溶液浸泡19分钟，浸泡完成后用无菌水清洗3-4次去除残留的HgCl2。所述初代培养基的pH为5.8。实施例6一种川东龙胆的组培快繁方法，包括以下步骤：S1、取无病害的川东龙胆的茎尖；S2、对茎尖进行清洗和消毒杀菌；S3、将清洗和消毒杀菌完成后的茎尖移植进入到以MS为基本培养基的初代培养基中进行培养，其中初代培养基中的琼脂含量为6.1gL，蔗糖含量为30gL；S4、初代培养基培养35天。所述S2中对茎尖的清洗和消毒杀菌包括：将茎尖表面清洗干净，清洗完成后，使用0.5％的高锰酸钾溶液杀菌3分钟，用自来水冲洗3次后，用75％乙醇浸泡30秒，再用0.1％HgCl2溶液浸泡20分钟，浸泡完成后用无菌水清洗3-4次去除残留的HgCl2。所述初代培养基的pH为5.8。设计实验并记录：选取健康无病害的川东龙胆植若干株，分别取其茎尖、茎段、根块，其中所选取的茎尖长为2cm，茎段带2个节，根块长为1cm、具2-3个分枝，其中根块总数为80个，随机分成4组，每组20个，分别使用实施例一至实施例四的方法进行培养；茎段总数为100个，随机取出其中的50个，使用实施例五的方法进行培养；茎尖的总数为60个，使用实施例六的方法进行培养。同时培养的海拔高度与川东龙胆的生长高度相近均在海拔2000米左右，记录在培养过程中每个实施例的生长状况，其中生长状况包括有：需要说明的是，本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。上述描述仅是对本发明较佳实施例的描述，并非对本发明范围的任何限定，本发明领域的普通技术人员根据上述揭示内容做的任何变更、修饰，均属于权利要求书的保护范围。

权利要求：1.一种川东龙胆的组培快繁方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、取无病害的川东龙胆根茎交界处的根块；S2、对根块进行清洗和消毒杀菌；S3、将清洗和消毒杀菌完成后的根块移植进入到以MS为基本培养基的初代培养基中进行培养，其中初代培养基中的琼脂含量为6-6.5gL，蔗糖含量为25-35gL；S4、S3中的根块在初代培养基培养35-40天后，长出若干不定芽，选取不定芽长度为3-6cm的植株，将植株取出并对根块进行分切，并使得每块新切的根块上都带有2-3个不定芽；S5、将新切的每个根块移植到以MS为基本培养基的增殖培养基中进行培养，其中增殖培养基中的琼脂含量为6-6.5gL，蔗糖含量为25-35gL，NAA含量为0.08-0.12mgL，6-BA含量为0.4-0.6mgL；S6、对S5中同一根块上不定芽的芽长超过5cm的数量为7-9个的植株进行两步分切，第一步对芽长超过5cm的分枝进行截断，截断后留下茎段的长度为1cm，第二步对根块进行分切，并使得每个分切的根块上的不定芽数量为2-3个；S7、待增殖培养基中植物的数量达到设定值后，将植物取出，选取茎粗达到1.5-2.0mm的芽连带基部根茎组织进行单个分离，其余的继续培养，将分离的植物植入到以MS为基本培养基的生根培养基中进行培养，其中生根培养基中的琼脂含量为5-6gL，蔗糖含量为25-35gL，活性炭含量为0.08-0.12gL，NAA含量为0.02-0.08mgL；S8、生根培养25-35天后，将植物整体取出并移植到口径为5cm的炼苗袋中炼苗，炼苗完成后移栽到栽培容器中。2.根据权利要求1所述的一种川东龙胆的组培快繁方法，其特征在于：所述S2中对根块的清洗和消毒杀菌包括：将根块表面清洗干净，清洗完成后，使用0.5％的高锰酸钾溶液杀菌3分钟，用自来水冲洗3次后，用75％乙醇浸泡30秒，再用0.1％HgCl2溶液浸泡18-20分钟，浸泡完成后用无菌水清洗3-4次去除残留的HgCl2。3.根据权利要求2所述的一种川东龙胆的组培快繁方法，其特征在于：所述S3中初代培养基中的琼脂含量为6.25gL，蔗糖含量为30gL。4.根据权利要求3所述的一种川东龙胆的组培快繁方法，其特征在于：所述S5中增殖培养基中的琼脂含量为6.25gL，蔗糖含量为30gL，NAA含量为0.10mgL，6-BA含量为0.50mgL。5.根据权利要求4所述的一种川东龙胆的组培快繁方法，其特征在于：所述S7中生根培养基中的琼脂含量为5gL，蔗糖含量为30gL，活性炭含量为0.10gL，NAA含量为0.05mgL。6.根据权利要求1所述的一种川东龙胆的组培快繁方法，其特征在于：所述S3、S5和S7培养时，培养植株的培养瓶上均覆盖有覆盖膜，S8中在进行炼苗之前，先将培养瓶移动到炼苗的环境中，将覆盖膜揭开，放置2-3天后再移植到炼苗袋中。7.根据权利要求1所述的一种川东龙胆的组培快繁方法，其特征在于：所述初代培养基、增殖培养基和生根培养基的pH均为5.8。

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