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申请/专利权人:盛禾(中国)生物制药有限公司
摘要:本发明公开一种敲除FUT8基因以提高抗体ADCC活性的方法。利用CRISPRCas9技术编码CHO细胞的FUT8基因,得到FUT8基因沉默的CHO细胞。通过对工程化细胞表达抗体的理化性质及生物活性检测:糖型检测结果表明工程化细胞表达的抗体的岩藻糖完全消除,以曲妥珠单抗为对照,工程化细胞表达的完全无岩藻糖抗体与FcγRs抗原亲和力提高20倍,ADCC效应提高19倍。
主权项:1.一种敲除FUT8基因的方法,其特征在于,所述方法包括:利用CRISPRCas9技术,针对CHO细胞FUT8基因的exon1和exon7区域各设计一对sgRNA,构建FUT8敲除载体质粒1和质粒2;将质粒1和质粒2转染进CHO细胞,敲除CHO细胞中的FUT8基因,得到FUT8基因沉默的稳定工程化细胞。
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