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申请/专利权人：深圳铭毅智造科技有限公司
摘要：本发明涉及一种基于环境敏感染料的单色荧光MRT基因测序试剂及方法，包括聚合酶、四种不同的被标记的核苷酸类似物，四种核苷酸类似物的核苷酸3′位置处的羟基均被保护基团或可切割连接基团修饰，且保护基团或可切割连接基团能被切割脱离重新将3′‑OH裸露出来，可切割连接基团通过共价键或非共价键与环境高敏荧光基团或环境高敏荧光基团标记物链接；四种核苷酸类似物是能发出或不能发出荧光的核苷酸衍生物，并同时公开了利用该试剂进行基因测序的方法。该发明可以有效的识别并催化3′‑O处有大分子基团修饰时进行聚合反应并进行SBS测序，消除以往二代SBS测序方法中由碱基上残基积累而导致影响测序读长的问题。
主权项：1.一种基于环境敏感染料的单色荧光MRT基因测序试剂，其特征在于:包括聚合酶、四种不同的被标记的核苷酸类似物，四种所述核苷酸类似物的核苷酸3′位置处的羟基均被保护基团或可切割连接基团修饰，且保护基团或可切割连接基团能被切割脱离重新将3′-OH裸露出来，所述可切割连接基团通过共价键或非共价键与环境高敏荧光基团或环境高敏荧光基团标记物链接；四种所述核苷酸类似物分别是化合物1、化合物2、化合物3和化合物4，其中，化合物1是不能发岀荧光信号或不带有荧光基团的核苷酸衍生物；化合物2是能发出荧光信号的携带有荧光基团的核苷酸衍生物；化合物3是携带有环境高敏荧光基团的核苷酸衍生物，在一种条件下不能发岀荧光信号或能发出荧光信号且发出的荧光信号与化合物2发出的荧光信号不同，在另一种条件下能发出荧光信号且发出的荧光信号与化合物2发出的荧光信号相同，所述环境高敏荧光基团的结构与化合物2中的荧光基团的结构不同；化合物4是不能发岀荧光信号的但携带有能发生连接反应的可反应性基团的核苷酸衍生物，所述可反应性基团与可反应性荧光基团发生连接反应后能够发岀与化合物1相同的荧光信号；或者化合物4是能够发岀与化合物2相同的荧光信号，但携带有与化合物2不同的可断裂链荧光基团的核苷酸衍生物，所述可断裂链荧光基团能在一定条件下可断裂移除，此条件对化合物2没有影响。
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